柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103804452103804452A(43)申请公布日2014.05.21(21)申请号201310456934.1(22)申请日2013.09.30(71)申请人淮北市恒通生物科技有限公司地址235000安徽省淮北市烈山区宁疃镇新园村(72)发明人孔艳飞(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.C07J9/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页(54)发明名称柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法(57)摘要本发明公开了一种柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，包括过滤、蛋白沉淀处理、除色素处理、盐析、萃取、脱水浓缩和柱层析分离等步骤。本发明以羊胆汁作为提取原料，不仅降低了牛磺胆酸的提取成本，而且提取工艺更为简单，收益更高。本发明以柱层析分离法提取牛磺胆酸，柱层析分离纯化效果好，提取的牛磺胆酸精品无腥味、纯度高，且产品收率高，提取工艺简单，利于工业化大生产。CN103804452ACN1038452ACN103804452A权利要求书1/1页1.柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）过滤：取新鲜羊胆汁于双层沙布内静置过滤24～48小时，收集滤液；（2）蛋白沉淀处理：于步骤（1）的滤液中加入2～4倍体积量的蛋白沉淀剂，搅拌后以10000～20000rpm/min、4～10℃离心30～60分钟，收集得到黄绿色上清液；（3）除色素处理：于步骤（2）的上清液中加入10～20g/100ml活性碳，30～50℃加热10～30分钟，冷却后以10000～20000rpm/min、4～10℃离心30～60分钟，收集得到无色上清液；（4）浓缩：将步骤（3）的上清液于旋转蒸发仪浓缩10～20倍；（5）盐析：于步骤（4）的浓缩液体中加入10～50倍体积量的水，使用酸调节pH值为6.0～7.0，加入氯化钠至搅拌出现白色沉淀物，于4～10℃放置过夜；（6）萃取：用体积比为（4～10）：（1：3）氯仿：乙醇的混合液溶解步骤（5）的沉淀物，用分液漏斗萃取2～5次，蒸馏回收混合液的，得到粘稠液体；（7）脱水浓缩：将步骤（6）的粘稠液体用无水硫酸钠过滤除去其中水分，得到牛磺胆酸粗品；（8）柱层析分离：将上述牛磺胆酸粗品加入硅胶层析柱上，用体积比为2～4：0.5～1：2～4的氯仿、异丙醇和乙醇作为流动相洗脱，收集460nm处有吸收值的液体，置于旋转蒸发仪中浓缩回收流动相，收集所得白色结晶冷冻保存，即为牛磺胆酸的纯品。2.如权利要求1所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（2）使用的蛋白沉淀剂为甲醇、乙醇和乙腈的一种或两种组成的混合溶剂。3.如权利要求2所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（2）使用的蛋白沉淀剂为乙腈。4.如权利要求1所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（5）使用的酸为盐酸、甲酸或醋酸。5.如权利要求4所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（5）使用的酸为盐酸。6.如权利要求1所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（6）中氯仿与乙醇的体积比为4：1。7.如权利要求1所述的柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于：所述步骤（8）的流动相中氯仿与异丙醇和乙醇。2CN103804452A说明书1/5页柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法[0001]技术领域[0002]本发明属于生物医药技术领域，涉及牛磺胆酸的提取方法，具体涉及柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法。背景技术[0003]胆汁酸是药用胆汁中的主要成分，是各种胆酸类的总称。各种胆酸类在肝中与甘氨酸或牛磺酸结合，并以钠盐的形式分泌到胆中。甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠作为胆盐的主要成分，在体内与脂肪的消化和吸收有重要的关系，其不但能增强脂肪酶的活性，催化脂肪分解，增加脂溶性维生素的吸收，还能促进胆汁的分泌，刺激小肠运动。[0004]牛磺胆酸广泛存在于牛、羊、蛇、兔等动物的胆汁中，是由胆酸和牛磺酸结合形成的一种结合型胆汁酸。牛磺胆酸具有利胆、杀菌、抗炎、镇咳、祛痰、平喘的作用，可以降血压、降低心脏收缩幅度及频率等多种药理作用，是非常具有开发应用前景的药物。[0005]目前，牛磺胆酸主要是从牛的胆汁中提取，而牛的胆汁来源较为困难。同时，由于牛的胆汁与羊的胆汁成分有一定的差异，如蛋白质等杂质含量不同，当常规的牛胆汁提取方法在用于从羊胆汁中提取牛磺胆酸时，不仅提取率低下，而且产品中杂质含量高，因此，需要一种适用于从羊胆汁中提取牛磺胆