一种大豆根瘤内生菌DEnt1302及其制备方法和应用,菌剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104651286A(43)申请公布日2015.05.27(21)申请号201510119822.6C12N9/18(2006.01)(2006.01)(22)申请日2015.03.18C12N9/26C12N9/88(2006.01)(83)生物保藏信息C12P17/10(2006.01)CCTCCNO：M20136212013.12.01C12R1/19(2006.01)(71)申请人商丘师范学院地址476000河南省商丘市平原路55号(72)发明人赵龙飞徐亚军(74)专利代理机构郑州睿信知识产权代理有限公司41119代理人牛爱周(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A01N63/00(2006.01)A01P21/00(2006.01)权利要求书1页说明书12页C12N9/42(2006.01)序列表2页附图6页(54)发明名称一种大豆根瘤内生菌DEnt1302及其制备方法和应用，菌剂及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种大豆根瘤内生菌DEnt1302及其制备方法和应用，菌剂及其制备方法，属于微生物技术领域。本发明大豆根瘤内生菌DEnet1302，为肠杆菌(Enterobacterludwigi)DEnt1302，其保藏编号为CCTCCNO：M2013621，具有溶解无机磷的能力，能够产生果胶酶和纤维素酶，ACC脱氨酶、吲哚乙酸，促进小麦幼苗生长。本发明大豆根瘤内生菌的制备方法，采用牛肉膏蛋白胨培养基，并采用单菌落划线分离纯化培养的方式，分离得到大豆根瘤内生菌，操作简便，易于控制，纯度高。本发明采用大豆根瘤内生菌的菌悬液与无菌水复配制备的菌剂具有促小麦幼苗生长的作用。CN104651286ACN104651286A权利要求书1/1页1.一种大豆根瘤内生菌DEnt1302，其特征在于，所述大豆根瘤内生菌DEnt1302为肠杆菌(Enterobacterludwigi)DEnt1302，其保藏编号为CCTCCNO：M2013621。2.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：1)对大豆根瘤进行表面消毒处理；2)在无菌条件下，取表面消毒处理后的大豆根瘤汁液涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基平板上进行培养；3)步骤2)培养获得的单菌落分别转移到牛肉膏蛋白胨培养基上进行划线分离，筛选获得菌体大小均一，形状一致的菌株，即得所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302。3.如权利要求2所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：每1000ml水中含有牛肉膏2～4g，蛋白胨8～12g，NaCl3～6g，琼脂15～20g。4.一种促小麦幼苗生长的菌剂，其特征在于，由含有如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302的菌悬液与无菌水复配而成；其中菌悬液的浓度为108CFU/ml，菌悬液与无菌水的体积比为(1～2)：(1～5)。5.一种如权利要求4所述的促小麦幼苗生长的菌剂的制备方法，其特征在于，包括采用YM液体培养基对如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302进行活化培养后，收集菌体，制成浓度为108CFU/ml的菌悬液，将菌悬液与无菌水复配，即得所述的促小麦幼苗生长的菌剂。6.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302在促进小麦生长方面的应用。7.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302在制备纤维素酶方面的应用。8.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302在制备果胶酶方面的应用。9.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302在制备ACC脱氨酶方面的应用。10.一种如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌DEnt1302在制备吲哚乙酸方面的应用。2CN104651286A说明书1/12页一种大豆根瘤内生菌DEnt1302及其制备方法和应用，菌剂及其制备方法技术领域[0001]本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种大豆根瘤内生菌DEnt1302及其制备方法和应用，菌剂及其制备方法。背景技术[0002]小麦是我国的大宗作物，每年施用大量化肥来提高作物小麦的生长和产量给土壤结构和生态环境带来极大的破坏。目前，开发和筛选生物促生菌株来研发生物促生菌剂，对保持绿色农业和生态环境的可持续发展具有重要意义。一些对草类和其他作物植物具有生长促进作用的土壤微生物菌株如Azospirillumsp.，Enterobactersp.，Pseudomonassp.，Klebsiellasp.，Serratiasp.，Bacillussp.，Enterobactersp.，Pantoeasp.，Listeriasp.，Xanthomonassp