间充质干细胞培养试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105713872A(43)申请公布日2016.06.29(21)申请号201610201894.X(22)申请日2016.03.31(71)申请人赵顺英地址211100江苏省南京市江宁区天元东路818号南京医科大学(72)发明人赵顺英(74)专利代理机构长沙星耀专利事务所43205代理人许伯严(51)Int.Cl.C12N5/0775(2010.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称间充质干细胞培养试剂盒(57)摘要本发明公开了间充质干细胞培养试剂盒，包括细胞培养液A和细胞培养液B；所述细胞培养液A为含80～120ng/ml细胞因子LIF、80～120ng/ml细胞因子bFGF和20～30μg/mlGranulodieneA的Knockout-DMEM培养基；所述细胞培养液B为胎牛血清。采用本发明提供的细胞培养液将脐带间充质干细胞传代15次后，细胞仍然维持很高的纯度和良好的全能性。采用本发明提供的细胞培养液培养骨髓间充质干细胞，也取得了同样好的效果。这些结果表明，本发明提供的培养试剂盒能够提高间充质干细胞原代细胞传代时间，使间充质干细胞多次传代后依然保持有细胞全能性。CN105713872ACN105713872A权利要求书1/1页1.一种间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：包括细胞培养液A和细胞培养液B；所述细胞培养液A为含80～120ng/ml细胞因子LIF、80～120ng/ml细胞因子bFGF和20～30μg/mlGranulodieneA的Knockout-DMEM培养基；所述细胞培养液B为胎牛血清。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述细胞培养液A为含100ng/ml细胞因子LIF、100ng/ml细胞因子bFGF和25μg/mlGranulodieneA的Knockout-DMEM培养基。3.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。4.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。5.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述细胞培养液A和细胞培养液B均为无菌，并各自独立包装。6.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：还包括细胞洗涤液和细胞消化液；所述细胞洗涤液为生理盐水；所述细胞消化液为CollagenaseII水溶液。7.根据权利要求6所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述细胞消化液为浓度为0.2g/100ml的CollagenaseII水溶液。8.根据权利要求6所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述生理盐水由氯化钠和水组成，氯化钠的浓度为0.9g/100ml。9.根据权利要求6所述的间充质干细胞培养试剂盒，其特征在于：所述细胞培养液A、细胞培养液B、细胞洗涤液和细胞消化液均为无菌，并各自独立包装。10.权利要求1～9任一所述间充质干细胞培养试剂盒在间充质干细胞培养中的应用。2CN105713872A说明书1/4页间充质干细胞培养试剂盒技术领域[0001]本发明属于干细胞培养领域，具体涉及一种间充质干细胞培养试剂盒。背景技术[0002]间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。[0003]间充质干细胞包括脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。[0004]脐带间充质干细胞是一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞，具有来源广泛、易于采集、保存和运输、无异体排斥、避免伦理争议等诸多优点。流式细胞仪分析发现脐带间充质干细胞高表达间质细胞标志(CD44、CD105)、整合素受体(CD29、CD49b、CD49c、CD51)、不表达造血系标志(CD34、CD45)白细胞抗原HLA-DR和内皮细胞标志CD31。脐带间充质干细胞在体内外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及神经元细胞等。目前人脐带间充质干细胞在组织工程骨、人工血管以及基因治疗等临床应用研究中已逐渐深入，并已显示出广阔的应用前景。目前，对脐带间充质干细胞的分离培养、扩增还没有统一的标准，存在纯度低、原代培养时间长等缺点。各种类型的成纤维成体干细胞扩增一般在2～3天