用于间充质干细胞培养的试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102965335A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102965335A(43)申请公布日2013.03.13(21)申请号201110257416.8(22)申请日2011.09.01(71)申请人北京清美联创干细胞科技有限公司地址100097北京市海淀区闵庄路3号清华科技园玉泉慧谷7栋2层204室(72)发明人田杰(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12N5/0775(2010.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书55页页附图附图22页(54)发明名称用于间充质干细胞培养的试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于间充质干细胞培养的试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括细胞培养液A和细胞培养液B；所述细胞培养液A为含80-120ng/ml细胞因子LIF与80-120ng/ml细胞因子bFGF的Knockout-DMEM培养基；所述细胞培养液B为胎牛血清。本发明提供的试剂盒能从离体脐带中分离脐带间充质干细胞，并培养所述脐带间充质干细胞，具有细胞扩增速度快、扩增效率高的优点，且多次传代后依然保持有细胞全能性。本发明解决了脐带间充质干细胞分离的纯度、数量和原代培养时间问题，可以获得大量脐带间充质干细胞，为利用脐带间充质干细胞进行进一步实验研究提供了丰富的来源。CN1029653ACN102965335A权利要求书1/1页1.用于间充质干细胞培养的试剂盒，包括细胞培养液A和细胞培养液B；所述细胞培养液A为含80-120ng/ml细胞因子LIF与80-120ng/ml细胞因子bFGF的Knockout-DMEM培养基；所述细胞培养液B为胎牛血清。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述培养液A中，含100ng/ml细胞因子LIF与100ng/ml细胞因子bFGF。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括细胞洗涤液和细胞消化液；所述细胞洗涤液为生理盐水；所述细胞消化液为CollagenaseII水溶液。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞消化液为0.2g/100mlCollagenaseII水溶液；所述生理盐水由氯化钠和水组成，氯化钠的浓度为0.9g/100ml。5.如权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞洗涤液、所述细胞培养液A、所述细胞培养液B和所述细胞消化液均为无菌的；所述试剂盒中，所述细胞洗涤液、所述细胞培养液A、所述细胞培养液B和所述细胞消化液均独立包装。6.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞培养液A和所述细胞培养液B均为无菌的；所述试剂盒中，所述细胞培养液A和所述细胞培养液B均独立包装。7.如权利要求1至6中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞；所述脐带间充质干细胞优选为离体的脐带间充质干细胞。8.权利要求1至7中任一所述试剂盒在间充质干细胞培养中的应用。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述细胞培养液A和所述细胞培养液B按照5∶1的体积比混合。10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞；所述脐带间充质干细胞优选为离体的脐带间充质干细胞。2CN102965335A说明书1/5页用于间充质干细胞培养的试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种用于间充质干细胞培养的试剂盒及其应用。背景技术[0002]间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。间充质干细胞包括脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。[0003]脐带间充质干细胞是一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞，具有来源广泛、易于采集、保存和运输、无异体排斥、避免伦理争议等诸多优点。流式细胞仪分析发现脐带间充质干细胞高表达间质细胞标志(CD44、CD105)、整合素受体(CD29、CD49b、CD49c、CD51)、不表达造血系标志(CD34、CD45)白细胞抗原HLA-DR和内皮细胞标志CD31。脐带间充质干细胞在体内外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及神经元细胞等。目前人脐带间充质干细胞在组织工程骨、人工血管以及基因治疗等临床应用研究中已逐渐深入，并已显示出广阔的