O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105807052A(43)申请公布日2016.07.27(21)申请号201610319998.0(22)申请日2016.05.13(71)申请人郑州中道生物技术有限公司地址450000河南省郑州市高新区国家大学科技园（东区）5号楼F座(72)发明人张杰王盼曾小宇苗银萍卜攀攀柴素真李伟豪鲁龙任宝红余清卫赵林萍(74)专利代理机构北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙)11512代理人张群峰吕良(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒(57)摘要一种O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，该检测试剂盒中含有酶标板、洗涤液、样品稀释液、HRP标记兔抗、底物A液、底物B液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清以及封板膜，其中所述酶标板包被有O型FMDV基因工程抗原。该试剂盒采用一步法加样，检测时间缩短。使用HRP标记兔抗代替酶标二抗，消除动物种属差异，可检测猪、牛、羊等血清样品。该试剂盒可克服现有血清学诊断技术的不足，具备敏感、特异、快速、制备简单等特点，可广泛应用于O型FMD疫苗免疫效果监测及流行病学调查。CN105807052ACN105807052A权利要求书1/1页1.一种O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，该试剂盒中含有酶标板、洗涤液、样品稀释液、HRP标记兔抗、底物A液、底物B液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清以及封板膜，其中所述酶标板包被有O型FMDV基因工程抗原。2.根据权利要求1所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，其中所述O型FMDV基因工程抗原的基因序列为NCBI基因数据库O型FMDVO/HKN/10/2004衣壳蛋白编码序列GenBank：DQ164887.1。3.根据权利要求1所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，其中所述酶标板包被O型FMDV基因工程抗原的过程为：用包被缓冲液将抗原稀释，以100uL/孔的量加入酶标板，4℃包被12h，用洗涤液洗涤3次；加入封闭液，200uL/孔，37℃封闭2h；甩去封闭液，洗板3次，置于37℃干燥，用铝箔真空密封。4.根据权利要求3所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，所述包被缓冲液为pH9.6的碳酸盐缓冲液。5.根据权利要求3所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，所述封闭液为含10％胰蛋白胨的PBS缓冲液。6.根据权利要求3所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，其中所述HRP标记兔抗以基因工程技术表达的O型FMDV衣壳蛋白为免疫原，免疫兔子获得血清，血清经饱和硫酸铵和G柱纯化后与HRP进行偶联。7.根据权利要求1所述的O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，其中HRP标记兔抗被预先配置成标准液，配置过程为：取Tris2.42g，酶稳定剂0.8g，氯化钠8.5g，红染料2g，新生牛血清100ml，Proclin3000.5ml，曲拉通X-1001.5ml，加蒸馏水850ml，加入盐酸1.65ml，充分混匀，调节pH值7.0，定容至1000ml，加入HRP标记兔抗0.2ml，搅拌均匀，用0.22μm的除菌滤器过滤。2CN105807052A说明书1/6页O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及一种可用于检测O型FMDV抗体的直接竞争ELISA试剂盒，属于生物技术领域。背景技术[0002]口蹄疫(foot-and-mouthdisease，FMD)是一种高度接触性传染病，猪、牛、羊等偶蹄类动物最易感。口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，FMDV)目前共有7个血清型，分别命名为O、A、C、南非I(SAT1)、南非II(SAT2)、南非III(SAT3)和亚洲I(Asia1)，不同的FMDV血清型之间不产生交叉免疫保护。自2005年到2014年，我国一共向世界动物卫生组织(OIE)报道了115次FMD疫情，其中Asia1型疫情46次，O型疫情38次，A型疫情31次。2009年以后，我国主要流行O型和A型FMD疫情，其中O型FMDV变异性强，传播广泛，严重危害畜牧养殖业发展。[0003]FMDV是一种多抗原表位、高度变异的病毒。病毒无囊膜结构，衣壳蛋白由VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白组成。研究表明，O型FMDV表面至少有5个中和抗原表位，其中3个表位集中在VP1蛋白，由G-H环的133-157和C端的200-213氨基酸残基组成的线性表位是FMDV最重要的抗原位点，也是影响抗原变异的关键位点。VP1蛋白可诱导动物产生中和抗体，是