一种高效蛋白转膜缓冲液及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105866220A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610239178.0(22)申请日2016.04.18(71)申请人苏州新赛美生物科技有限公司地址215000江苏省苏州市吴中区东吴北路19号1502A号(72)发明人杨勇刘永双(74)专利代理机构北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙)11411代理人刘刚(51)Int.Cl.G01N27/447(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种高效蛋白转膜缓冲液及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种高效蛋白转膜缓冲液，其包括以下各组分：Tris的浓度为10mM-100mM；牛磺酸的浓度为10mM-200mM。本发明的高效转膜缓冲液相对于目前常用的传统转膜缓冲液相比，使用了缓冲能力更强的牛磺酸成分，提高了缓冲液在电泳时的缓冲能力，对分子量范围宽泛的蛋白质分子都有很高的转膜效率，可以缩短蛋白转膜的时间，同时，该缓冲液在电泳时产生的热量较低，不需要借助冰袋等来降温，简化了转膜时的操作，且需要的甲醇浓度更低，在10％的浓度就可以实现较好的转膜效果。CN105866220ACN105866220A权利要求书1/1页1.一种高效蛋白转膜缓冲液，其特征在于，包括以下各组分：Tris的浓度为10mM-100mM；牛磺酸的浓度为10mM-200mM。2.根据权利要求1所述的高效蛋白转膜缓冲液，其特征在于，包括以下各组分：Tris的浓度为10mM；牛磺酸的浓度为10mM。3.根据权利要求1所述的高效蛋白转膜缓冲液，其特征在于，包括以下各组分：Tris的浓度为100mM；牛磺酸的浓度为200mM。4.根据权利要求1所述的高效蛋白转膜缓冲液，其特征在于，包括以下各组分：Tris的浓度为40mM；牛磺酸的浓度为70mM。5.根据权利要求1～4任一所述的高效蛋白转膜缓冲液，其特征在于，还包括以下组分：甲醇的体积分数为5-10％和/或SDS的质量分数为0.01-0.05％。6.一种高效蛋白质转移缓冲液的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)称量下列试剂，置于1000ml烧杯中：Tris10-100mM；牛磺酸10-200mM；SDS0.1-0.5g；(2)向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌混匀；(3)加入50-100ml的甲醇,加去离子水将溶液定容至1000ml后室温保存。7.一种高效蛋白质转移缓冲液的使用方法，其特征在于，具体包括以下步骤：a.将PAGE凝胶浸于转膜缓冲液中平衡10分钟；b.根据凝胶的大小裁剪膜和滤纸，放入转膜缓冲液中平衡10分钟，如果使用PVDF膜需要用甲醇浸泡饱和5-10秒钟；c.装配转移三明治转膜体系：依次装配海绵、3层滤纸、凝胶、3层滤纸、海绵；每层放好后，将气泡赶去；d.将转膜槽置于冰浴中，放入三明治转膜结构，加入转移缓冲液，插上电极，开始设置0.3A的恒流电泳。2CN105866220A说明书1/4页一种高效蛋白转膜缓冲液及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种高效蛋白转膜缓冲液及其制备方法。背景技术[0002]蛋白质印迹法即WesternBlot，是分子生物学，免疫遗传学和生物化学中常见的一种实验方法，是将电泳分离后的细胞或组织蛋白质从凝胶转移到固相支撑物上，如硝酸纤维素膜(NC膜)、聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)，再用特异性抗体检测特定抗原的一种蛋白质检测技术。如今已广泛应用于抗体活性检测、疾病早期诊断和蛋白质水平表达研究等多个方面。转膜是蛋白质印迹实验中一个重要的步骤，经过聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离后的蛋白质需要经过转膜步骤，即从PAGE胶转移到固相支持物上，才能用各种方法进行WesternBlot的检测和显色。[0003]转膜过程通常是在半液体或液体环境中进行的，转膜缓冲液可以给电场提供介质，让蛋白在电场力的作用下从负极向正极泳动，因此转膜缓冲液在蛋白质转移效率中起重要的作用。目前常用的转膜缓冲液都是基于Tris-Glycine，，构成一个转膜缓冲液系统。用该转膜缓冲液系统转移蛋白时，电泳液温度会随时间延长显著增加，高温会降低转膜的效果，还会使得PAGE胶和固相支撑物发生位移，蛋白条带发生变形等情况发生，因此常需要加入冰袋或者在冰上转膜来降低转膜时产生的高温。此外，Tris-Glycine转膜缓冲液对高分子量的蛋白质转移效果较低，只能让部分大分子蛋白从PAGE胶转移至固相支撑物上。该体系还需加入20％的甲醇、SDS等物质，其中甲醇被大众所熟知的，是一种具有毒性的物质，高浓度的甲醇对人体会造成强的伤害。发明内容[0004]本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种高效的蛋白质转移缓冲液及其制备方法。