一种蛋白转膜液及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115508563A(43)申请公布日2022.12.23(21)申请号202211158536.7(22)申请日2022.09.22(71)申请人深圳市库源生物科技有限公司地址518100广东省深圳市宝安区石岩街道应人石社区天宝路19号润兴发工业园厂房1栋401西侧(72)发明人丁文鹏王靖鹏丁闻滕彩英(74)专利代理机构广州帮专高智知识产权代理事务所(特殊普通合伙)44674专利代理师胡洋(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种蛋白转膜液及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种蛋白转膜液及其制备方法和应用，属于生物免疫学技术领域。该蛋白转膜液包括pH缓冲对、三(羟甲基)甲基甘氨酸、络合剂、多功能助剂和超纯水，蛋白转膜液的pH8.3‑8.4。本发明的蛋白转膜液的原料购买简便，蛋白转膜液制备简单，转膜后结果确实可靠，显影结果与传统转膜液的显影结果相比较稳定、确实可信，长期使用不易形成结晶，显著减少了电转时间，在400mA电流下只需要20min即可完成转膜，显著提高了免疫蛋白印记的效率。且蛋白转膜液本身不含对人体有害的挥发性溶液甲醇。CN115508563ACN115508563A权利要求书1/1页1.一种蛋白转膜液，其特征在于，包括：pH缓冲对、三(羟甲基)甲基甘氨酸、络合剂、多功能助剂和超纯水，蛋白转膜液的pH8.3‑8.4；所述pH缓冲对选自4‑羟乙基哌嗪丙磺酸、3‑(N‑吗啉基)丙磺酸或三羟甲基氨基甲烷与甘氨酸组成的缓冲对；所述络合剂选自乙二胺四乙酸二钠或乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸；所述多功能助剂选自亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、偏重亚硫酸盐、低亚硫酸钠中的至少一种。2.如权利要求1所述的一种蛋白转膜液，其特征在于，所述pH缓冲对为三羟甲基氨基甲烷与甘氨酸组成的缓冲对；三羟甲基氨基甲烷的含量为330mM‑340mM、甘氨酸的含量为250mM‑270mM。3.如权利要求1所述的一种蛋白转膜液，其特征在于，三(羟甲基)甲基甘氨酸的含量为130mM‑150mM。4.如权利要求1所述的一种蛋白转膜液，其特征在于，所述络合剂为乙二胺四乙酸二钠，其含量为2mM‑3mM。5.如权利要求1所述的一种蛋白转膜液，其特征在于，所述多功能助剂为亚硫酸氢钠，含量为0.1mM‑0.2mM。6.一种蛋白转膜液，其特征在于，包括：336mM三羟甲基氨基甲烷、260mM甘氨酸、140mM三(羟甲基)甲基甘氨酸、2.5mM乙二胺四乙酸二钠、1.3mM亚硫酸氢钠。7.如权利要求1～6任一项所述的一种蛋白转膜液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取原料加入到超纯水中，充分搅拌溶解，补充超纯水至接近1000ml，使用HCl或NaOH调pH至8.3‑8.4；容量瓶定容1L。8.如权利要求1～6任一项所述的一种蛋白转膜液在免疫蛋白印记中作为蛋白转膜液的应用。9.如权利要求6所述的应用，蛋白转膜液在电泳凝胶和作为固相载体的PVDF膜或NC膜或尼龙膜之间进行蛋白转膜。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：A：在电泳结束前开始准备转膜所需的滤纸、海绵和固相载体膜；B：固相载体膜使用前用无水甲醇浸泡；C：电泳完成后，将玻璃板撬开，将凝胶轻轻刮下；D：平放转移槽的底座，在石墨电极上依次平铺叠放海绵一、浸泡过蛋白转膜液的滤纸一、固相载体膜、剥下的凝胶和浸泡过蛋白转膜液的滤纸二、海绵二，堆叠过程中对每一层进行压除气泡处理；E：用干净纱布将叠层上和周围的多余蛋白转膜液吸干，最后将转移槽的上盖扣上，将转膜槽中加入蛋白转膜液，使用biorad电泳仪接通电源设置400mA恒电流，开始转膜。2CN115508563A说明书1/4页一种蛋白转膜液及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物免疫学技术领域，涉及的是一种应用于免疫蛋白印记技术中电泳凝胶和固相载体膜之间进行蛋白转膜的蛋白转膜液及其制备方法和应用。背景技术[0002]转膜是许多研究和诊断实验室常用的技术。WesternBlot(免疫蛋白印记)通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。用于Westernblot的杂交膜主要有两种：NC膜(硝酸纤维素薄膜)和PVDF膜(聚偏二氟乙烯膜)，可依据目的蛋白与膜的结合能力及膜的孔径来挑选不同的转移膜。[0003]转膜方法分为湿转法和半干转法，两种方法各有利弊。湿转转膜效率最佳，但浪费试剂和溶液且费时；半干转