牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105954428A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610518597.8(22)申请日2016.07.05(71)申请人国家烟草质量监督检验中心地址450001河南省郑州市高新区枫杨街2号(72)发明人韩书磊陈欢马潇付亚宁刘彤侯宏卫胡清源(74)专利代理机构郑州中民专利代理有限公司41110代理人姜振东(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图3页(54)发明名称牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法(57)摘要一种牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：采用正己烷/氢氧化钠水溶液体系将牛肝菌中的烟碱提取出来后，再经过阳离子交换固相萃取对萃取液进行净化，并采用配有毛细管色谱柱的气相色谱仪将烟碱和萃取液中的其他杂质分开，利用气相色谱—同位素质谱仪GC-IRMS分析牛肝菌中烟碱的碳稳定同位素比值δ13C，氢稳定同位素比值δD和氮稳定同位素比值δ15N，再根据烟碱同位素标准物质中的δ12C、δD和δ15N测定值，校准计算牛肝菌中烟碱的δ12C、δD和δ15N值。本发明利用GC-IRMS技术，实现了牛肝菌中烟碱的碳、氢、氮稳定同位素比值的准确测定，为相关产品中烟碱的溯源提供了技术支持和科学依据。CN105954428ACN105954428A权利要求书1/2页1.一种牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：采用正己烷/氢氧化钠水溶液体系将牛肝菌中的烟碱提取出来后，再经过阳离子交换固相萃取对萃取液进行净化，并采用配有毛细管色谱柱的气相色谱仪将烟碱与萃取液中的其他杂质分开，利用气相色谱—同位素质谱仪GC-IRMS分析牛肝菌中烟碱的碳稳定同位素比值δ13C，氢稳定同位素比值δD和氮稳定同位素比值δ15N，再根据烟碱同位素标准物质中的δ12C、δD和δ15N测定值，校准计算牛肝菌中烟碱的δ12C、δD和δ15N值。2.根据权利要求1所述的牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：(1)牛肝菌中的烟碱的提取、浓缩与净化：采用正己烷/氢氧化钠水溶液体系将牛肝菌中的烟碱提取出来后，再经过阳离子交换固相萃取对烟碱进行净化；(2)采用带有毛细管气相色谱柱的气相色谱仪将烟碱与萃取液中的其他杂质分开；(3)用在线燃烧装置将烟碱中的C转化成CO2，将烟碱中的N转化成N2，用同位素质谱仪1315（IRMS）测定烟碱产生CO2中的δC和N2中的δN值；(4)将在线燃烧装置切换为热转化模式，用同位素质谱仪IRMS测定烟碱产生H2中的δD值；(5)通过标准物质已标定的δ13C，δD和δ15N值，得到牛肝菌中烟碱的δ13C，δD和δ15N值。3.根据权利要求1所述的牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：步骤（1）中的提取与净化过程如下：提取：称取5g牛肝菌样品，置于50mL离心管中，分别加入30mL1%氢氧化钠水溶液和5mL正己烷，2000rpm下涡旋10min后，在10000rpm下离心2min，将上层有机相转移至另一个50mL离心管中，再以5mL正己烷萃取两次，合并有机相；浓缩、净化：用甲酸将有机相的pH值调至3-4，然后在40℃下将其氮吹浓缩近干，加入3mL2%甲酸水溶液溶解残渣后，使用阳离子交换固相萃取小柱进行净化处理，其步骤为：萃取柱使用前分别用3mL甲醇、3mL水和3mL2%甲酸水溶液活化，之后将待净化溶液转移至柱中，依次用3mL水和3mL甲醇淋洗，然后用10mL5%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液用甲酸调pH值至3-4，40℃下氮吹浓缩近干，残渣用5%氢氧化钠水溶液调pH值至碱性，加入1.5mL二氯甲烷，在2000rpm下涡旋2min后，以10000rpm离心1min，再取有机相进行GC-IRMS分析。4.根据权利要求2所述的牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：步骤（2）中的气相色谱条件为：色谱柱：中等极性毛细管色谱柱，规格30m×0.32mm×0.25μm；检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；载气：氮气，恒流流速：2.0mL/min；进样量：1μL，分流比：10:1，测定δD和δ15N时采用不分流模式；升温程序：初始温度80℃，保持1min，以15℃/min的速率至260℃，保持6min。5.根据权利要求2所述的牛肝菌中烟碱碳、氢、氮稳定同位素比值的测定方法，其特征在于：步骤（3）、（4）所用的在线燃烧装置条件为：测定δ13C或δ15N：使用氧化燃烧管，设置温度为1000℃，管内填装镍/氧化镍(Ni/NiO)，氧化镍作弱氧化剂，将样品中的C氧化成CO2，将样品中N氧