一种动物源性成分检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106244698A(43)申请公布日2016.12.21(21)申请号201610704724.3(22)申请日2016.08.22(71)申请人四川华汉三创生物科技有限公司地址610000四川省成都市高新区府城大道西段399号10栋12层4号(72)发明人霍胜楠刘菲云振宇曾莲周钧李文静王锋黄广平(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人吴开磊(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表6页附图3页(54)发明名称一种动物源性成分检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种动物源性成分检测试剂盒，其包括SEQIDNO.1～22所示的引物对中的至少三种引物对的引物组合，其能够对猪、牛、貉、羊、鸡、鸭、兔、狐、貂、驴以及鼠等11种动物源成分进行检测，具有特异性强、灵敏度高特点，且检测结果可视化程度高。直接用肉眼即可进行判断，成本低，能适用于各种食品的动物源成分的大规模检测。CN106244698ACN106244698A权利要求书1/2页1.一种动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，其包括引物组合，所述引物组合包括选自SEQIDNO.1～2所示的用于检测猪源性成分的引物对、SEQIDNO.3～4所示的用于检测牛源性成分的引物对、SEQIDNO.5～6所示的用于检测貉源性成分的引物对、SEQIDNO.7～8所示的用于检测羊源性成分的引物对、SEQIDNO.9～10所示的用于检测鸡源性成分的引物对、SEQIDNO.11～12所示的用于检测鸭源性成分的引物对、SEQIDNO.13～14所示的用于检测兔源性成分的引物对、SEQIDNO.15～16所示的用于检测狐源性成分的引物对、SEQIDNO.17～18所示的用于检测貂源性成分的引物对、SEQIDNO.19～20所示的用于检测驴源性成分的引物对和SEQIDNO.21～22所示的用于检测鼠源性成分的引物对中的至少三种引物对的组合，所述引物组合的各引物对中的正向引物的5’端或反向引物的5’端带有生物素标记。2.根据权利要求1所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述引物组合还包括用于检测内参基因的内参引物对。3.根据权利要求2所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述内参基因为18SrRNA基因，所述内参引物对如SEQIDNO.23～24所示，所述内参引物对中的反向引物的5’端标记带有生物素标记。4.根据权利要求3所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述动物源性成分检测试剂盒还包括膜芯片，所述膜芯片为表面固定有探针的支持膜，所述探针包括SEQIDNO.25所示的内参探针、SEQIDNO.26～36所示的检测探针、SEQIDNO.37所示的阳性探针以及SEQIDNO.38所示的阴性探针。5.根据权利要求4所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述支持膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜或聚丙烯膜。6.根据权利要求4所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述动物源性成分检测试剂盒还包括辅料，所述辅料包括dNTPs、EX-Taq聚合酶、5’端带生物素标记的阳性寡核苷酸单链DNA，所述阳性寡核苷酸单链DNA的碱基序列如SEQIDNO.39所示。7.根据权利要求4所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述动物源性成分检测试剂盒还包括配液，所述配液包括：10×PCR缓冲液、预杂交液、杂交液、洗液、封闭液、链霉亲和素标记辣根过氧化物酶和四甲基联苯胺显色液，所述链霉亲和素标记辣根过氧化物酶为所述催化酶。8.根据权利要求7所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述预杂交液为5×SSC，0.1％重量百分比十二烷基磺酸钠和10×Denhardt’s液，其中，SSC为0.75M氯化钠和0.075M柠檬酸钠，Denhardt’s液为1％Ficoll聚蔗糖,1％聚乙烯吡咯烷酮,l％BSA牛血清白蛋白；所述杂交液为5×SSC，0.1％重量百分比十二烷基磺酸钠，5×Denhardt’s液，50％重量百分比去离子甲酰胺和100ug/ml酵母tRNA。9.根据权利要求7所述的动物源性成分检测试剂盒，其特征在于，所述洗液分别为洗液1、洗液2、洗液3和洗液4，其中，洗液1：2×SSC和0.1％重量百分比十二烷基磺酸钠，洗液2：0.5×SSC和0.1％重量百分比十二烷基磺酸钠，洗液3：100mMTris-HCl，PH7.5，150mMNaCl，洗液4：100mMTris-HCl，PH9.5，100mMNaCl和100mMMgCl2；所述封闭液为3％重量百分比牛血清白蛋白，100mMTris-HCl，PH7.5，150mMNaCl。10.根据权利要求7所述的动物源性成分