用于检测卡那霉素的检测试剂及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106442371A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201610868217.3(22)申请日2016.09.29(71)申请人湖南大学地址410082湖南省长沙市河西岳麓山湖南大学环境科学与工程学院(72)发明人秦蕾赖萃曾光明黄丹莲张辰刘希贵许飘程敏曹伟成(74)专利代理机构湖南兆弘专利事务所(普通合伙)43008代理人赵洪黄艺平(51)Int.Cl.G01N21/33(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图6页(54)发明名称用于检测卡那霉素的检测试剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种用于检测卡那霉素的检测试剂及其制备方法和应用，该检测试剂包括纳米金颗粒溶液和4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液。本发明的检测试剂具有灵敏度高、选择性好、特异性强、简单快速、成本低廉、操作方便、对环境无害等优点，能够用于对待测溶液中的卡那霉素进行定量和定性检测，对卡那霉素检测的检出限为0.004μM，能够满足欧盟对牛奶中卡那霉素的含量的最高浓度标准限值。CN106442371ACN106442371A权利要求书1/2页1.一种用于检测卡那霉素的检测试剂，其特征在于，包括纳米金颗粒溶液和4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂中还包括NaHSO4溶液。3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述纳米金颗粒溶液、所述4-氨基-3-35联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液和NaHSO4溶液的摩尔浓度比为1∶1×10～1×10∶1×107。4.一种如权利要求2或3所述的检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将NaHSO4溶液与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液振荡混合，充分混合，得到AHMT-NaHSO4混合溶液；(2)往纳米金颗粒溶液中加入所述步骤(1)得到的AHMT-NaHSO4混合溶液，在避光条件下振荡，离心重溶，得到用于检测卡那霉素的检测试剂。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液的浓度为10μM～1000μM；所述纳米金颗粒溶液中纳米金颗粒的浓度为10nM；所述NaHSO4溶液的浓度为0.1M。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂溶液的浓度为10μM～75μM。7.一种权利要求1～3中任一项所述的检测试剂或权利要求4～6中任一项所述的制备方法制备得到的检测试剂在检测卡那霉素中的应用，其特征在于，所述应用方法为：将待测溶液加入到检测试剂中进行反应，完成对待测溶液中卡那霉素的定量和/或定性检测。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述反应的温度为10℃～60℃，时间为0～10min；所述反应过程中pH值为6.4～8.0。9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述定性检测的方法为以下任意一种方法：方法一：所述反应完成后，根据反应前后反应体系中吸光度的变化定性判断待测溶液中是否含有卡那霉素，当待测溶液中含有卡那霉素时，纳米金颗粒在520nm处的紫外吸收峰发生红移；当待测溶液中不含有卡那霉素时，纳米金颗粒在520nm处的紫外吸收峰不发生红移；方法二：所述反应完成后，根据反应前后反应体系中颜色的变化定性判断待测溶液中是否含有卡那霉素，当待测溶液中含有卡那霉素时，随着卡那霉素的浓度逐渐升高，反应体系的颜色由酒红色逐渐变为浅紫色、深紫色、蓝色；当待测溶液中不含有卡那霉素时，反应体系的颜色为酒红色；方法三：所述反应完成后，根据所得反应体系在紫外可见吸收光谱中650nm及520nm处吸光度的比值A650/A520变化定性判断待测溶液中是否含有卡那霉素，当待测溶液中含有卡那霉素时，A650/A520大于0.0826；当待测溶液中不含有卡那霉素时，A650/A520小于0.0826。10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述定量检测的方法为：所述反应完成后，测定所得反应产物体系在紫外可见吸收光谱中650nm及520nm处吸光度的比值A650/A520，根据线性回归方程(1)或线性回归方程(2)计算待测溶液中卡那霉素的浓度；所述线性回归方程(1)为：y＝0.7749(±0.012)x+0.0795(±0.023)，其中y为紫外可见吸收光谱中650nm和520nm处的吸光度的比值A650/A520，x为所述待测溶液中卡那霉素的含2CN106442371A权利要求书2/2页量，单位为μM，所述线性回归方程(1)中相关系数为0.9936，所述线性回归方程(1)中卡那霉素的