促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106544318A(43)申请公布日2017.03.29(21)申请号201611058578.8(22)申请日2016.11.28(71)申请人广东万海细胞生物科技有限公司地址523000广东省东莞市松山湖高新技术产业开发区创新科技园9栋208室(72)发明人张严冬李相鲁(74)专利代理机构北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙)11531代理人李宏伟(51)Int.Cl.C12N5/077(2010.01)C12N5/0775(2010.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法(57)摘要本发明涉及一种促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，包括以下步骤：1）将脐带间充质干细胞经培养后，取第三代稳定生长密度为80％-95％的脐带间充质干细胞，保证了有足够多的基础干细胞，也更便于观察脐带间充质干细胞的分化增殖情况，PBS洗脐带间充质干细胞三遍，除去死细胞，更换新鲜含10%胎牛血清的高糖DMEM，培养15-24h；2）加入脂肪诱导培养基，培养2-4天；3）更换新鲜脂肪诱导培养基，培养6-14天。其具有可定向分化、增殖为脂肪细胞，温和无毒，且分化增殖率高的特点。CN106544318ACN106544318A权利要求书1/1页1.一种促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将脐带间充质干细胞经培养后，取第三代稳定生长密度为80％-95％的脐带间充质干细胞，PBS洗脐带间充质干细胞三遍，更换新鲜含10%胎牛血清的高糖DMEM，培养15-24h；2）加入脂肪诱导培养基，培养2-4天；3）更换新鲜脂肪诱导培养基，培养6-14天。2.根据权利要求1所述的促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：所述脂肪诱导培养基包括葡萄糖、地塞米松、青霉素、异丁基-甲基黄嘌呤、L-DMEM培养基。3.根据权利要求2所述的促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：所述脂肪诱导培养基的组分含量为：葡萄糖5-15mM地塞米松0.1-0.5mM青霉素35-60U/L异丁基-甲基黄嘌呤0.8-1.2mML-DMEM培养基余量。4.根据权利要求3所述的促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：所述脂肪诱导培养基的组分含量为：葡萄糖10mM地塞米松0.3mM青霉素45U/L异丁基-甲基黄嘌呤1.0mML-DMEM培养基余量。5.根据权利要求1所述的促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：步骤2）所述脐带间充质干细胞与脂肪诱导培养基的体积比为1:2-1:5。6.根据权利要求1所述的促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其特征在于：步骤3）所述脐带间充质干细胞与脂肪诱导培养基的体积比为1:4-1:10。2CN106544318A说明书1/5页促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术及细胞工程技术领域，尤其涉及促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法。背景技术[0002]干细胞是一类具有自我更新能力且在适合微环境下具有多系分化潜能的细胞。[0003]脐带间充质干细胞（MesenchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化为软骨细胞(chondrocyte)、成骨细胞(osteoblast)、脂肪细胞(adipocyte)、肌细胞(myocyte)、神经细胞(neuron)等多种组织细胞。[0004]然而怎样才能将其高效诱导分化成脂肪细胞，用于细胞生物治疗，其中仍存在许多问题亟需解决:1）采用的诱导因子复杂，不能保证干细胞沿预期方向分化、增殖，获得分化后的细胞不纯；2)脐带间充质干细胞沿脂肪细胞方向分化率不高。发明内容[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，其具有可定向分化、增殖为脂肪细胞，温和无毒，且分化增殖率高的特点。[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：促进脐带间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的方法，包括以下步骤：1）将脐带间充质干细胞经培养后，取第三代稳定生长密度为80％-95％的脐带间充质干细胞，保证了有足够多的基础干细胞，也更便于观察脐带间充质干细胞的分化增殖情况，PBS洗脐带间充质干细胞三遍，除去死细胞，更换新鲜含10%胎牛血清的高糖DMEM，培养15-24h；2）加入脂肪诱导培养基，培养2-4天；3）更换新鲜脂肪诱导培养基，培养6-14天。[0007]本发明的有益效果在于：更换新鲜含10%胎牛血清的高糖DMEM后培养15-24h再加入脂肪诱导培养基是为了使脐