一种用于环介导等温扩增的试剂及其试剂盒和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109161582A(43)申请公布日2019.01.08(21)申请号201810922940.4(22)申请日2018.08.14(71)申请人关明地址200333上海市普陀区宜川一村14号503室申请人曹国君(72)发明人关明曹国君(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272代理人俞涤炯(51)Int.Cl.C12Q1/6844(2018.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图1页(54)发明名称一种用于环介导等温扩增的试剂及其试剂盒和应用(57)摘要本发明涉及一种用于环介导等温扩增的试剂，其包括纳米颗粒、二硫苏糖醇、肽牛血清、氯化四甲基铵、海藻糖中的至少一种；本发明还涉及一种含有上述试剂的试剂盒及其应用，该试剂盒还包括：10×恒温buffer、dNTP混合物、MgSO4、BstDNA聚合酶、指示剂以及水，在由该试剂盒制得的环介导等温扩增反应体系中各组分的终浓度如下：纳米颗粒0-10mg/mL；二硫苏糖醇0-10M；肽牛血清0-10g/mL；氯化四甲基铵0-100mM；海藻糖0-50mM；dNTP混合物1.0-3.0mM；MgSO44-10mM；BstDNA聚合酶0.1-0.5U/μL。本发明在解决LAMP试剂高成本问题的同时确保检测质量，本发明所述的试剂盒具有与进口试剂相同的检测效果，其灵敏度、特异性和稳定性均可满足临床实验需求，但检测成本可以大幅度降低，具有良好的应用前景。CN109161582ACN109161582A权利要求书1/1页1.一种用于环介导等温扩增的试剂，其特征在于，包括纳米颗粒、二硫苏糖醇、肽牛血清、氯化四甲基铵、海藻糖中的至少一种。2.根据权利要求1所述的用于环介导等温扩增的试剂，其特征在于，所述纳米颗粒的材质包括金、银、二氧化硅、聚苯乙烯或石墨烯。3.根据权利要求权利要求1所述的用于环介导等温扩增的试剂，其特征在于，所述纳米材颗粒的表面带正电荷或不带电荷，其直径为0-1000nm。4.一种用于环介导等温扩增的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1～3中任一项所述的用于环介导等温扩增的试剂。5.根据权利要求4所述的一种用于环介导等温扩增的试剂盒，其特征在于，还包括：10×恒温buffer、dNTP混合物、MgSO4、BstDNA聚合酶以及指示剂。6.根据权利要求5所述的一种用于环介导等温扩增的试剂盒，其特征在于，在环介导等温扩增反应体系中各组分的终浓度如下：纳米颗粒0-10mg/mL；二硫苏糖醇0-10M；肽牛血清0-10g/mL；氯化四甲基铵0-100mM；海藻糖0-50mM；dNTP混合物1.0-3.0mM；MgSO44-10mM；BstDNA聚合酶0.1-0.5U/μL。7.根据权利要求6所述的一种用于环介导等温扩增的试剂盒，其特征在于，在环介导等温扩增反应体系中各组分的终浓度如下：dNTP混合物1.5mM；MgSO46mM；BstDNA聚合酶0.32U/μL；纳米颗粒0.012mg/mL；二硫苏糖醇0.08M；肽牛血清0.01g/mL；氯化四甲基铵2mM；海藻糖3.2mM。8.根据权利要求6所述的一种用于环介导等温扩增的试剂盒，其特征在于，所述环介导等温扩增反应体系的扩增条件为：60～68℃扩增20-60min。9.一种如权利要求5～8中任一项所述的试剂盒在LAMP扩增中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为用于CALR-2型突变的检测，在所述应用中使用如SEQIDNO：2～SEQIDNO：7所示序列的引物组合物。2CN109161582A说明书1/7页一种用于环介导等温扩增的试剂及其试剂盒和应用技术领域[0001]本发明属于核酸扩增技术领域，具体涉及一种用于环介导等温扩增的试剂，以及含有该试剂的试剂盒和该试剂盒的应用。背景技术[0002]环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)是一种不同于常规PCR的体外核酸基因扩增新技术。LAMP主要利用两对或三对特异性引物和具有链置换活性的BstDNA聚合酶，在恒温条件下的连续快速扩增。与传统的PCR技术相比，此技术具有更高的灵敏度、特异性和扩增效率，抗抑制物能力强，对核酸模板质量要求低，因此可以大大简化核酸抽提的步骤，此技术可以在1h内扩增出109～1010倍靶序列拷贝，检测结果的观察方式灵活多样，可以是：电泳法、浊度法(直接裸眼目视或使用专业设备)、染料法(通过反应体系颜色的变化直接判断结果)、实时荧光曲线法(类似于SYBR实时PCR法)，可以满足各种不同检测平台的要求，目前的应用已日益广泛，已应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域。在医学方面，LAMP技术已应用于细菌类病原微生