一种用于培养牛至愈伤组织的诱导培养基及诱导方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110651714A(43)申请公布日2020.01.07(21)申请号201911040606.7(22)申请日2019.10.29(71)申请人华东理工大学地址200237上海市徐汇区梅陇路130号(72)发明人郭美锦尹学健祝晓丰张幸子王泽建肖慈英储炬庄英萍(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种用于培养牛至愈伤组织的诱导培养基及诱导方法(57)摘要本发明公开了一种用于牛至愈伤组织的诱导培养基及诱导方法。其中的诱导培养基，以1L计，其包括如下用量的组分：B5基础盐培养基、蔗糖20～30g/L、琼脂6～8g/L、肌醇80～120mg/L、6-BA2～3.5mg/L、NAA0.2～0.6mg/L、黑曲霉提取物80～150mg/L、胆碱1～1.8g/L、其余为水。使用本发明的诱导培养基可用于培养牛至愈伤组织，愈伤组织诱导率可达70％～90％，愈伤组织状态良好，适合大规模悬浮培养。CN110651714ACN110651714A权利要求书1/1页1.一种用于培养牛至愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，以培养基1L计，其包括如下用量的组分：B5基础盐培养基、蔗糖20-30g/L、琼脂6-8g/L、肌醇80-120mg/L、6-BA2～3.5mg/L、NAA0.2～0.6mg/L、胆碱1～1.8g/L、黑曲霉提取物80～150mg/L，其余为水。2.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述的B5基础盐培养基为KNO32500mg/L、MgSO4·7H2O250mg/L、CaCl2·2H2O150mg/L、(NH4)2SO4134mg/L、NaH2PO4·H2O150mg/L、KI0.75mg/L、H3BO33.0mg/L、MnSO4·4H2O10mg/L、ZnSO4·7H2O2.0mg/L、Na2MoO4·2H2O0.25mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、Na2-EDTA37.3mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫铵素10mg/L。3.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述蔗糖的用量为23～27g/L；和/或，所述琼脂的用量为7-8g/L；和/或，所述肌醇的用量为90-110mg/L；和/或，所述6-BA的用量为2.5～3mg/L；和/或，所述NAA的用量为0.4～0.6mg/L；和/或，所述胆碱的用量为1.3～1.6g/L；和/或，所述黑曲霉提取物的用量为100～130mg/L。4.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述黑曲霉提取物通过以下步骤制得：将黑曲霉菌丝用0.05～0.2mol/L，pH为6～7的磷酸盐缓冲液洗涤，再经匀浆、抽滤、121℃灭菌15～20min后即为黑曲霉提取物。5.如权利要求4所述的诱导培养基，其特征在于，所述的磷酸缓冲溶液的浓度为0.1mol/L。6.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，以培养基1L计，其包括如下用量的组分：B5基础盐培养基、蔗糖23～27g/L、琼脂7～8g/L、肌醇90～110mg/L、6-BA2.5～3mg/L、NAA0.4～0.6mg/L、胆碱1.3～1.6g/L、黑曲霉提取物100～130mg/L、其余为水，所述黑曲霉提取物通过以下步骤制得：将黑曲霉菌丝用0.05～0.2mol/L，pH为6～7的磷酸盐缓冲液洗涤，再经匀浆、抽滤、121℃灭菌15～20min后即为黑曲霉提取物。7.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，以培养基1L计，其由如下用量的组分组成：B5基础盐培养基、蔗糖23～27g/L、琼脂7～8g/L、肌醇90～110mg/L、6-BA2.5～3mg/L、NAA0.4～0.6mg/L、胆碱1.3～1.6g/L、黑曲霉提取物100～130mg/L、其余为水，所述黑曲霉提取物通过以下步骤制得：将黑曲霉菌丝用0.05～0.2mol/L，pH为6～7的磷酸盐缓冲液洗涤，再经匀浆、抽滤、121℃灭菌15～20min后即为黑曲霉提取物。8.一种用于牛至愈伤组织的诱方法，其特征在于，其采用权利要求1-7任一项所述的诱导培养基进行诱导牛至愈伤组织：步骤(1)制备牛至无菌苗；步骤(2)牛至愈伤组织诱导：将步骤(1)中的牛至无菌苗修剪出叶、茎、根，将叶、茎、根分别接入所述的诱导培养基中，得牛至胚性愈伤组织；步骤(3)从步骤(2)中的牛至胚性愈伤组织传代培养4代后，得状态均一稳定的牛至胚性愈伤组织，然后接入牛至液体培养基中进行悬浮培养。2CN110651714A说明书1/5页一种用于培养牛至愈伤组织的