一种原代肿瘤细胞筛选培养基及利用该培养基构建肿瘤细胞系的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110938600A(43)申请公布日2020.03.31(21)申请号201911110725.5(22)申请日2019.11.14(71)申请人天津市肿瘤医院地址300060天津市河西区体院北环湖西路(72)发明人王珂于敏(74)专利代理机构北京东岩跃扬知识产权代理事务所(普通合伙)11559代理人谷岳(51)Int.Cl.C12N5/09(2010.01)C12R1/91(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图2页(54)发明名称一种原代肿瘤细胞筛选培养基及利用该培养基构建肿瘤细胞系的方法(57)摘要本发明提供了一种原代肿瘤细胞筛选培养基，所述原代肿瘤细胞筛选培养基由以下体积百分比的成分组成：5％～20％的无细胞腹水、3％～15％的胎牛血清，其余为哺乳动物细胞培养基。本发明提供的筛选培养基成分能够选择性杀伤间质细胞，对肿瘤细胞生长具有高选择性。同时，能够提高肿瘤细胞的增殖速度，缩短培养周期。本发明提供的肿瘤细胞系构建方法可以纯化癌细胞系至99％以上，大大提高了体外构建肿瘤细胞系的成功率。CN110938600ACN110938600A权利要求书1/1页1.一种原代肿瘤细胞筛选培养基，其特征在于，所述原代肿瘤细胞筛选培养基由以下体积百分比的成分组成：5％～20％的无细胞腹水、3％～15％的胎牛血清，其余为哺乳动物细胞培养基。2.根据权利要求1所述的原代肿瘤细胞筛选培养基，其特征在于，所述原代肿瘤细胞筛选培养基还包含抗生素。3.根据权利要求2所述的原代肿瘤细胞筛选培养基，其特征在于，所述原代肿瘤细胞筛选培养基由以下体积百分比的成分组成：15％的无细胞腹水、5％的胎牛血清、1％的双抗，其余为DMEM培养基。4.一种如权利要求1～3任意一项所述的原代肿瘤细胞筛选培养基在构建或培养肿瘤细胞系中的应用。5.一种如权利要求1～3任意一项所述的原代肿瘤细胞筛选培养基在构建卵巢癌肿瘤细胞系中的应用。6.一种如权利要求1～3任意一项所述的原代肿瘤细胞筛选培养基在细胞培养过程中去除间质细胞污染中的应用。7.一种构建肿瘤细胞系的方法，其特征在于，取癌症患者的腹水和/或胸水，去除红细胞，将剩余细胞在完全培养基中继续培养，当培养至汇合度不低于70％时，将完全培养基换成筛选培养基，培养至全部为上皮肿瘤细胞，即得；其中，所述筛选培养基为权利要求1～3任意一项所述的原代肿瘤细胞筛选培养基。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述癌症患者为产生腹水和/或胸水的癌症患者，优选为卵巢癌患者。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述去除红细胞后，将细胞在完全培养基中继续培养至细胞悬液中的间质细胞黏附，然后将上皮细胞凝块吹起，转移至其他培养瓶继续培养。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在将完全培养基换成筛选培养基后，还包含以下步骤：去除筛选培养基，洗涤细胞沉淀后加入细胞消化液，当间质细胞收缩变圆但上皮细胞还未收缩时，轻拍敲打培养瓶使间质细胞脱离，去除间质细胞后，在筛选培养基中继续培养至全部为上皮肿瘤细胞。11.一种肿瘤细胞系，其特征在于，所述肿瘤细胞系由如权利要求7～10任意一项所述的方法制得，所述肿瘤细胞系优选为卵巢癌细胞系。2CN110938600A说明书1/9页一种原代肿瘤细胞筛选培养基及利用该培养基构建肿瘤细胞系的方法技术领域[0001]本发明涉及细胞生物学领域，特别涉及一种培养基及利用该培养基构建肿瘤细胞系的方法。背景技术[0002]细胞系作为癌症模型目前已被广泛使用，它们能反映该病的临床问题。这些应用包括药物抗性的机制、新药筛选和药物开发、原癌基因/抑癌基因表达的分析、黏附和转化的模型建立以及通过肽生长因子、细胞因子和激素对增殖的控制研究。[0003]但在现有技术中，用临床样本建立肿瘤细胞系的成功率只有不到30％。失败的原因常常归结于上皮细胞缺乏增殖，这常伴随有间质细胞的过度增殖。以人卵巢癌细胞系为例，建立可长期生存的卵巢癌细胞系是比较困难的，本领域技术人员所面临的困难主要是培养物中成纤维细胞的过度增生、难以确定培养条件，难以连续传代以及建立细胞系之后的鉴定。[0004]以上这些问题都在很大程度上限制了人们对癌症的研究，因此急需寻找一种方法来提高构建肿瘤细胞系的成功率。发明内容[0005]为了解决上述技术问题，本发明的一个方面是提供了一种原代肿瘤细胞筛选培养基，其能够有效减少间皮细胞污染，分离纯化出纯度高的肿瘤细胞。[0006]本发明提供的技术方案为：[0007]一种原代肿瘤细胞筛选培养基，所述培养基由以下体积百分比的成分组成：5％～20％的无细胞腹水、3％～15％的胎牛血清，其余为哺乳动物细胞培养基。[0008]在现有技术中，用临床样本建立肿瘤细