一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法和用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960832A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202111180583.7(22)申请日2021.10.11(71)申请人合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司地址230094安徽省合肥市高新区习友路2666号中科院合肥技术创新工程院研发楼主楼801-816室(72)发明人刘青松赫玉影黄涛陈程(74)专利代理机构北京尚诚知识产权代理有限公司11322专利代理师龙淳李巍(51)Int.Cl.C12N5/09(2010.01)C12N5/071(2010.01)C12Q1/02(2006.01)权利要求书7页说明书24页附图12页(54)发明名称一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法和用途(57)摘要本发明提供一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法及其应用。该培养基包含MST1/2激酶抑制剂；胰岛素，选自Y27632、法舒地尔、和H‑1152中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素‑转铁蛋白‑硒补充剂；谷氨酰胺添加剂；神经调节蛋白1；牛脑垂体提取物；碱性成纤维生长因子；R‑spondin1；前列腺素E2；和B27。与现有培养方式相比，使用本发明的培养基进行的体外培养具有更高的扩增效率；用该培养基进行肠癌原代的培养，能够维持原发组织的形态结构和病理特征，提高肠癌原代细胞培养的成功率和存活率。CN115960832ACN115960832A权利要求书1/7页1.一种肠癌原代细胞的培养基，其特征在于，包含：培养基包含MST1/2激酶抑制剂；胰岛素；选自Y27632、法舒地尔、和H‑1152中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素‑转铁蛋白‑硒补充剂；谷氨酰胺添加剂；神经调节蛋白1；牛脑垂体提取物；碱性成纤维生长因子；R‑spondin1；前列腺素E2；和B27，其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，其中，R1选自C1‑C6烷基、C3‑C6环烷基、C4‑C8环烷基烷基、C2‑C6螺环烷基、以及任选地被1‑2个独立地R6取代的芳基、芳基C1‑C6烷基和杂芳基；R2和R3各自独立地选自C1‑C6烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1‑C6烷基、C3‑C6环烷基、C4‑C8环烷基烷基、C1‑C6烷基羟基、C1‑C6卤代烷基、C1‑C6烷基氨基C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基C1‑C6烷基、和C3‑C6杂环基C1‑C6烷基；R6选自卤素、C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基、和C1‑C6卤代烷基。2.如权利要求1所述的培养基，其中R1选自C1‑C6烷基、C3‑C6环烷基、C4‑C8环烷基烷基、C2‑C6螺环烷基、以及任选地被1‑2个独立地R6取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；R2和R3各自独立地选自C1‑C3烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1‑C6烷基、C3‑C6环烷基、C4‑C8环烷基烷基、C1‑C6烷基羟基、C1‑C6卤代烷基、C1‑C6烷基氨基C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基C1‑C6烷基、哌啶基C1‑C6烷基、和四氢吡喃基C1‑C6烷基；R6选自卤素、C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基、和C1‑C6卤代烷基。3.如权利要求1所述的培养基，其中所述MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，2CN115960832A权利要求书2/7页其中，R1选自C1‑C6烷基、任选地被1‑2个独立地R6取代的苯基、任选地被1‑2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1‑2个独立地R6取代的苯甲基；R5选自氢、C1‑C6烷基、和C3‑C6环烷基；R6各自独立地选自卤素、C1‑C6烷基、和C1‑C6卤代烷基。4.如权利要求3所述的培养基，其中R1为任选地被1‑2个独立地R6取代的苯基；R5为氢；R6优选为氟、甲基或三氟甲基。5.如权利要求1所述的培养基，其中所述MST1/2激酶抑制剂选自以下化合物或其药学可接受的盐中的至少一种：3CN115960832A权利要求书3/7页4CN115960832A权利要求书4/7页5CN115960832A权利要求书5/7页6CN115960832A权利要求书6/7页7CN115960832A权利要求书7/7页6.如权利要求1～5中任一项所述的培养基，其特征在于所述培养基中各成分的含量满足以下任意一项或多项或全部满足：(1)所述MST1/2激酶抑制剂在培养基中的含量为1.25～5μM；(2)所述胰岛素在培养基中的含量为1～9μg/mL；(3)所述Rho蛋白激酶抑制剂在培养基中的含量为1.25～20μM；(4)所述胰岛素‑转铁蛋白‑硒补充剂相对于培养基的体积比为1:400～1:100；(5)所述谷氨酰胺添加剂在培养基中的含量为0.5～2mM；(6)所述神经调节蛋白‑