生物药物分离纯化技术实验指导.pdf

实验一蔗糖密度梯度离心分离实验

一、实验目的
1.熟悉蔗糖密度梯度离心原理
2.熟练掌握蔗糖密度梯度离心操作技术
二、实验原理
溶液的密度自上而下逐渐变化的分布状态称为密度梯度。在超速离心技术中，样品的密
度应该分布在溶液的密度梯度范围内。
三、材料、试剂及仪器
1.试剂
20%、40%、60%、80%的蔗糖溶液；墨汁。
2.仪器
烧杯，普通离心机，试管若干。
四、实验步骤
1.梯度液的制备
（1）制备出不同浓度的蔗糖溶液，浓度间隔相同，分别是浓度为20%、40%、60%、80%
的蔗糖溶液。
（2）每个浓度量取相同的体积，按浓度依次减小的顺序逐个缓慢铺入离心管中，制成不
连续阶梯密度梯度。
（3）此离心管在20-25℃静止2-3h，通过重力作用即成接近线性的蔗糖密度梯度液。若
用细铁丝轻敲离心管，静置时间可以缩短至0.5-1h。温度低时所需静置的时间较长，
温度高的时候则较短。为减少对流，静置后应将离心管置于冰浴中备用。
2.蔗糖密度梯度离心
向已形成密度梯度的离心管中加入半滴墨汁，加入离心管中离心，3000r/min离心10min，
观察实验现象。
五、结果与分析
蔗糖密度梯度离心和差速离心有什么区别？
实验二双水相相图的制备

一、实验目的
1.了解双水相萃取的原理和发展历史、趋势
2.掌握用浊点法制作双水相系统相图的方法
二、实验原理
某些亲水性高分子聚合物的水溶液超过一定浓度后可形成两相，并且在两相中水分占很
大比例，即形成双水相。常见的双水相系统可分为两类，即双聚合物体系和聚合物/盐体系。
双水相形成的条件和定量关系可用相图来表示，它是研究双水相萃取的基础。相图是一根双
节线，当成相组分的配比在曲线的下方时，
系统为均匀的单相，混合后溶液澄清透明，
称为均相区；当配比在曲线的上方时，能自
动分成两相，称为两相区；若配比在曲线上，
混合后，溶液恰好由澄清变为浑浊。
连接双节线上的两点的直线称为系线，
它由三点确定,即M(初始混合物组成情况)、
T(上相组成情况)、B(下相组成情况)，其中
T/B互为共扼相。系线越长，两相间的差别
越大，当系线长度趋向零时，两相差别消失。
系线上系统的总浓度不同，但均分成组成相
同体积不同的两相，两相体积服从杠杆规则：
ＶＴ／ＶＢ＝ＢＭ／ＭＴ
三、材料、试剂及仪器
1.试剂
PEG400；硫酸铵。
2.仪器
漩涡振荡器、微量滴管装置、电子天平。
四、实验步骤
1.双水相系统的制作
（1）精确配制43%（g/ml）的(NH)SO溶液，并测定其密度。
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（2）精确称取PEG400液体0.7g于试管中，按表格中所列第一号数据，用吸管加入0.5
毫升水，缓慢滴加已配制好的(NH)SO溶液，并在混合器上混合，观察溶液的澄清程度，直
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至试管内溶液开始出现浑浊为止，记录(NH)SO的加入量，根据密度求出重量。
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（3）按下表列出的第2号数据加入水，使其澄清，继续向试管中滴加(NH)SO溶液，
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使其再次达到浑浊。如此反复操作，计算每次达到浑浊时PEG400和(NH)SO在系统总量中
424
的百分含量。
序加水量加(NH)SO纯(NH)SO纯(NH)SO溶液累计PEG400(NH)SO
424424424424
号（ml）溶液量（ml）新增量（g）累积量（g）总量（ml）重量百分重量百分
比比
1
2
3
4
5
6
7
2.相图的绘制
以PEG400的重量百分比浓度为纵坐标，(NH)SO的重量百分比浓度为横坐标作图，即
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得到一条双节线的相图。
五、注意事项
1.微量滴定管在使用前必须先洗涤干净，否则容易产生气泡或发生堵塞现象。洗涤时，
不用去污粉，可用铬酸洗液或洗涤液先浸泡一段时间后，用一根细长的刻度移液管刷刷洗刻
度处，最后用蒸馏水反复冲洗数次。
2.清洗干净的微量滴定管必须先用蒸馏水试漏，如有漏液，可涂少量凡士林（过量的凡
士林会堵塞滴定管）。试漏成功的滴定管要润洗两次，即注液杯、支管、刻度管和出液尖嘴
用滴定液洗涤两遍。
3.由于支管拐弯处易藏气泡，一般待滴定液放满刻度管后打开支管旋塞用洗耳球将溶液
中气泡刚好吹入贮液杯中即可，也可缓慢倾斜滴定管使气泡从口部溢出。
4.滴定过程要注意爱护仪器，轻拿轻放。用(NH)SO4滴定时，在接近滴定终点左右时
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一定要每滴一滴，便彻底混匀后方可滴定下一滴。
六、思考问题
1双水相萃取中相图有何意义？
2双水相萃取在分离生物大分子物质时有何意义？
实验三牛血清蛋白在双水相萃取系统中的分配

一、实验目的
1.了解双水相萃取的原理和方法
2.双水相系统分离蛋白质的操作
二、实验原理
某些亲水性高分子聚合物的水溶液超过一定浓度后可形成两相，并且在两相中水分占很
大比例，即形成双水相。常见的双水相系统可分为两类，即双