药物分离纯化技术---制备色谱分离技术.ppt

制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术常用溶剂(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等；(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术制备色谱技术加压制备OPLC弹性气垫外压使没有气相存在展开剂强制流动展开速度加快离心制备CTLC离心力加速流动相分离速度快操作简单占用空间小使用溶剂少可反复使用可进行梯度洗脱进样量大一次分离量0.1-0.2g.不同制备TLC方法的比较常规柱色谱技术：可使用较大直径的色谱柱更多的固定相因此样品量可以更大；分离速度较慢样品可能被不可逆吸附；不适合小颗粒的吸附剂？改进方法：减压、加压等柱色谱常用固定相(1)硅胶：官能团和分子的几何形状对异构体的分离选择性远大于其他色谱方法。烷基<卤素（F<Cl<Br<I）<醚<硝基混合物<腈<叔胺<酯<酮<醛<醇<酚<伯胺<酰胺<羧酸<磺酸掺杂硅胶：如硝酸银处理对不饱和烃有好的分离效果。1%-10%的添加剂的水或丙酮溶液与硅胶混合稍干后110℃干燥即可。(2)健合硅胶(3)氧化铝碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10常用于碳氢化合物的分离从碳氢化合物中除去含氧化合物。中性氧化铝：5%乙酸处理水提取液为pH7.5适用于醛、酮、醌、某些苷以及酸碱溶液中不稳定成分如酯、内酯等化合物的分离。酸性氧化铝：2MHCl溶液处理水提取液pH为4-4.5适合于天然及合成酸性色素以及某些醛、酸的分离。(4)活性炭：分离水溶性物质吸附作用在水溶液中最强用有机溶剂洗脱。对芳香族的吸附力大于脂肪族；对大分子吸附力大于小分子；对极性基团多的分子吸附力大于少的；易吸附气体“中毒”用前需活化120℃加热4-5小时；(5)聚酰胺：又称为锦纶或尼龙同时具有良好的亲水性和亲脂性；可溶于浓盐酸、甲酸不溶于常见溶剂；含有丰富的酰胺基与酚类、黄酮类、醌类、脂肪酸类物质形成氢键；还含有非极性脂肪链双重保留机理；(6)大孔吸附树脂：苯乙烯和丙烯酸酯骨架结构决定树脂的极性：非极性、弱极性----苯乙烯或二乙烯基苯聚合而成；中等极性----甲基丙烯酸酯；极性、强极性----含氧硫基、酰胺基、氮氧等基团；吸附和分子筛分离相结合：网状结构大比表面积大孔吸附树脂使用：用前需预处理除去杂质：回流法、水蒸气蒸馏法；渗漉法----乙醇丙酮等有机溶剂湿法装柱浸泡12h后洗脱2-3倍柱体积再浸泡3-5h后洗脱2-3倍柱体积重复直到流出的有机溶剂与水混合不呈现白色乳浊现象为止用大量蒸馏水洗去乙醇即可。如单独采用有机溶剂洗不尽杂质则可用酸碱处理2-5%盐酸、2-5%NaOH溶液浸泡洗脱水洗。(7)凝胶：交联葡聚糖Sephadex----葡聚糖和3氯-12环氧丙烷以醚健交联形成的三维空间多孔凝胶交联度大孔小吸水膨胀小型号以其吸水量的10倍命名如SephadexG-25表示每克干胶吸水2.5g；引入羟丙基为LH型烷基化葡聚糖凝胶不仅可分离水溶性成分还可分离亲脂性成分常用于最后的纯化除去微量固体、盐类和其他外来杂质纯化过程中样品损失极小。甲基丙烯酸酯共聚物ToyopearlHW系列----乙二醇、甲基丙烯酸缩水甘油酯和二甲基丙烯酸季戊四醇酯共聚而成稳定性好pH2-12；机械强度高常用于加压柱色谱；在蛋白质、酶、核酸、多糖的纯化处理中应用较多；ToyopearlHW40可用于小分子物质的分离纯化与SephadexLH20有相似的效果。琼脂糖凝胶----D-半乳糖和36位脱水的L-半乳糖连接构成的多糖链100℃时呈液态45℃下互相连接成线性双链单环的琼脂糖再凝聚成琼脂糖凝胶。与13-二溴异丙醇在强碱条件下反应生成CL型交联琼脂糖稳定性更好pH3-14（一般的琼脂糖pH4.5-9.0）；机械强度和筛孔的稳定性由于葡聚糖流速较快。凝胶柱使用一般注意事项：(1)交联度决定凝胶孔径大小孔径决定排除下限；(2)颗粒粗细很重要细颗粒分离效果好但流速慢宜采用大直径柱粗颗粒流速快但分离效果差宜采用小直径柱；(3)干胶用量需考虑溶涨度(4)干胶使用前需在5-10倍的去离子水中充分溶涨倾倒掉小颗粒减压排气。也可用煮沸的方法溶涨速度快可灭菌排气。(5)填充均匀无空隙和气泡；(6)多次使用后床体积减小或污染可再生处理即用水逆向反复冲洗再用缓冲溶液平衡。(8)离子交换树脂----阳离子交换和阴离子交换价态高交换能力强；价态相