一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105580735A(43)申请公布日2016.05.18(21)申请号201610064635.7(22)申请日2016.02.01(71)申请人珀莱雅化妆品股份有限公司地址310012浙江省杭州市西湖区世贸丽晶城欧美中心1号楼（D区）1605室(72)发明人黄洁芳王丽娜毕永贤殷海琴陈斌蒋丽刚(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法(57)摘要本发明涉及一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法，所述培养液是由MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、精胺、亚精胺、蔗糖组成，所述6-苄氨基嘌呤的浓度为0.5~1.8mg/L，所述6-糖基氨基嘌呤的浓度为0.3~1.0mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.15~0.45mg/L，所述精胺的浓度为1.0~4.5mg/L，所述亚精胺的浓度为0.5~1.25mg/L，所述蔗糖浓度为20~50g/L；培养液pH为5~6。使用本发明的培养液对虎杖愈伤组织进行培养，白藜芦醇的含量可达细胞干重的0.12~0.18%，具有提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇的含量的有益效果。CN105580735ACN105580735A权利要求书1/1页1.一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液，其特征在于：在MS基础培养基中添加6-苄氨基嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、精胺、亚精胺、蔗糖，添加后，所述6-苄氨基嘌呤的浓度为0.5~1.8mg/L，所述6-糖基氨基嘌呤的浓度为0.3~1.0mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.15~0.45mg/L，所述精胺的浓度为1.0~4.5mg/L，所述亚精胺的浓度为0.5~1.25mg/L，所述蔗糖浓度为20~50g/L；培养液pH为5~6。2.一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养方法，其特征在于采用以下步骤：A、虎杖愈伤组织的诱导：选择虎杖茎段为外植体，在培养基中暗光（0lx）培养25天，诱导出愈伤组织，每20天继代一次，继代培养3次；所述培养基为MS基础培养基中添加6-苄氨基嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、精胺、亚精胺、蔗糖而成，所述培养基中6-苄氨基嘌呤浓度为1.0mg/L，6-糖基氨基嘌呤浓度为0.5mg/L，萘乙酸浓度为0.2mg/L，蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为8g/L，培养基pH5.8，培养温度25±1oC；B、愈伤组织悬浮扩大培养及次生代谢产物白藜芦醇的诱导：以步骤A中获得的生长旺盛、疏松、易散的愈伤组织为悬浮培养体系的种子细胞，将其接种在一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液中进行悬浮扩大培养，接种量为60~110g/L，g/L=愈伤组织鲜重/培养基体积，得到含有愈伤组织的培养液；所述一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液是含有0.5~1.8mg/L6-苄氨基嘌呤、0.3~1.0mg/L6-糖基氨基嘌呤、0.15~0.45mg/L萘乙酸、1.0~4.5mg/L精胺、0.5~1.25mg/L亚精胺、20~50g/L蔗糖的MS培养液，培养液pH为5~6；对所得含有愈伤组织的培养液进行诱导悬浮培养，诱导悬浮培养的条件为：振荡培养，摇床转速90~130rpm，光照强度1280~1760lx，光照时间12~16h/day，培养o温度25±1C，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气一次；每12~16天继代培养一次，继代培养2~4次后将继代周期缩短至6~10天，缩短继代周期后继续培养3~5代；在诱导悬浮培养继代周期的第4~8天，继代周期缩短后则在第2~5天时加入甲瓦龙酸内酯，甲瓦龙酸内酯在培养液中的终浓度为50~120mg/L，诱导悬浮培养结束后得到白藜芦醇含量高的虎杖愈伤组织细胞。2CN105580735A说明书1/6页一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，特别涉及一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法。技术背景[0002]白藜芦醇（resveratrol，简称Res）是一种含有芪类结构的非黄酮多酚化合物，化学名称为3,4,5—三羟基二苯乙烯（亦称芪三酚），它广泛存在于虎杖、花生、葡萄、黎芦等多种天然植物或果实中，目前已在21个科31个属的72种植物中被发现，其中以虎杖根茎部位中含量最为丰富。[0003]白藜芦醇具有抗癌、抗肿瘤、抗心血管疾病、抗炎、抗氧化等多种功能，被广泛应用于医药以及食品保健等行业中。在化妆品行业中，白藜芦醇则发挥其捕获自由基、抗氧化和抑制络氨酸酶活性的特性。市售的白黎芦醇主要从野生虎杖根茎中提取而得，但植物提取技术面临成本高、工艺复杂、得率低