一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105999284A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610297754.7A61K47/22(2006.01)(22)申请日2016.05.06A61K47/20(2006.01)A61K39/187(2006.01)(71)申请人江苏省农业科学院A61P31/14(2006.01)地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街50号(72)发明人吕芳赵艳红卢宇彭苗苗邓碧华张金秋候继波(74)专利代理机构南京汇盛专利商标事务所(普通合伙)32238代理人袁静(51)Int.Cl.A61K47/36(2006.01)A61K47/32(2006.01)A61K47/26(2006.01)A61K47/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用(57)摘要本发明提供一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用，属于兽用生物制品制造技术领域。该保护剂，由以下质量百分含量的组分组成：菊糖0.2%～2.5%、葡聚糖0.5%～12%、聚乙烯吡咯烷酮1%～6%、乳糖0.5%～12%、蔗糖0.2%～6%、聚乙二醇0.05%～2.5%、组氨酸0.005%～0.6%、半胱氨酸0.05%～4%、DMEM培养基0.2%～4%，其余为注射用水。本发明还提供该耐热冻干保护剂制备方法及应用。本发明耐热冻干保护剂不含外源蛋白及明胶，避免了对动物的应激反应以及副作用，大大提高了疫苗的安全性，在冷冻干燥及储存过程中能够高效保护抗原活性，增加了疫苗的稳定性。CN105999284ACN105999284A权利要求书1/1页1.一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂，其特征在于由以下质量百分含量的组分组成：菊糖0.2%～2.5%、葡聚糖0.5%～12%、聚乙烯吡咯烷酮1%～6%、乳糖0.5%～12%、蔗糖0.2%～6%、聚乙二醇0.05%～2.5%、组氨酸0.005%～0.6%、半胱氨酸0.05%～4%、DMEM培养基0.2%～4%，其余为注射用水。2.根据权利要求1所述用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂，其特征在于菊糖的聚合度为2～10，葡聚糖为Dextran-40或Dextran-70，聚乙烯吡咯烷酮为PVPK30或PVPK90，聚乙二醇为PEG200～400。3.权利要求1或2所述耐热冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将菊糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、蔗糖、聚乙二醇溶于水，采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；（2）将组氨酸、半胱氨酸和DMEM培养基溶于水，采用过滤法进行除菌；（3）将步骤（1）和（2）所得溶液混合，补足水，得到所述耐热冻干保护剂。4.权利要求1或2所述耐热冻干保护剂在制备猪瘟活疫苗方面的应用。5.采用权利要求1-2之一所述耐热冻干保护剂制备的猪瘟活疫苗。6.权利要求5所述猪瘟活疫苗的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将耐热冻干保护剂和猪瘟病毒液按体积比1:0.8～1.2混合，冷冻干燥后得到所述猪瘟活疫苗。7.根据权利要求6所述猪瘟活疫苗的制备方法，其特征在于所述冷冻干燥方法如下：将耐热冻干保护剂和猪瘟病毒液的混合物放在冻干机箱体内的隔板上，在常压、2～5℃条件下预冷20～40min，然后按照0.5～1℃/min的速度降温至-38～-42℃并维持3～5h；将冻干机的冷阱降至-48～-52℃，箱体内抽真空至300～400mTorr；然后将所述隔板以0.2～0.8℃/min的速度升温至-22～-28℃并维持14～18h，之后以0.1～0.4℃/min的速度升温至-12～-17℃并维持8～12h，最后以0.2～0.8℃/min升温至20～24℃并维持5～7h。2CN105999284A说明书1/6页一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于兽用生物制品制造技术领域，尤其是涉及用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用。背景技术[0002]猪瘟(classicalswinefever，CSF)俗称“烂肠瘟”，在欧美一些地区又称猪霍乱(hogcholera)、猪热病或古典猪瘟，是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus，CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病，临床上以发病急、高热稽留、全身泛发性点状出血和脾梗死为主要特征。猪瘟的死亡率高，会给养猪业造成巨大的安全隐患和经济损失。[0003]1908年，匈牙利Hutyra制备了CSFV高免血清，它能产生较强的保护力，但由于高免血清的价格昂贵，获取较困难，而且有散播的危险，故各国学者转向了灭活疫苗研究。灭活疫苗也存在免疫剂量大、免疫期短、