鸭腺病毒A型和2型Real time PCR检测引物、探针及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107043831A(43)申请公布日2017.08.15(21)申请号201710443593.2(22)申请日2017.06.13(71)申请人福建省农业科学院畜牧兽医研究所地址350013福建省福州市晋安区新店埔档(72)发明人万春和黄瑜陈翠腾程龙飞傅光华施少华陈红梅傅秋玲刘荣昌(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表2页附图5页(54)发明名称鸭腺病毒A型和2型RealtimePCR检测引物、探针及试剂盒(57)摘要本发明提供鸭腺病毒A型和鸭腺病毒2型实时荧光定量PCR检测引物、探针及试剂盒，所述引物和探针序列如SEQIDNO.1-6所示，具有很高的特异性和灵敏度。当前国内外尚未见可同时对鸭腺病毒A型和鸭腺病毒2型进行检测双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的引物和探针的研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。CN107043831ACN107043831A权利要求书1/1页1.鸭腺病毒A型和鸭腺病毒2型实时荧光定量PCR检测引物和探针，其特征在于：所述引物和探针包括如下：用于检测鸭腺病毒A型：上游引物DAdV-A-F：5’-TCCTCCTCATGGTTTTATG-3’，下游引物DAdV-A-R：5’-CGAAGATTGCAGTAGTATTAG-3’，荧光探针DAdV-A-P：5’-CCTGACACTGGCACGGCTAT-3’；用于检测鸭腺病毒2型：上游引物DAdV-2-F：5’-CGATGATGCAGATGATAAC-3’，下游引物DAdV-2-R：5’-GATCGCTCTGAGTTTAGG-3’，荧光探针DAdV-2-P：5’-ACCAGAACATACTCCAGAATCGTGA-3’；其中，鸭腺病毒A型的荧光探针DAdV-A-P的5′端标记有荧光报告基团ROX、鸭腺病毒2型的荧光探针DAdV-2-P的5′端标记有荧光报告基团FAM；，鸭腺病毒A型的荧光探针DAdV-A-P的3′端和鸭腺病毒2型的荧光探针DAdV-2-P的3′端均标记淬灭基团Eclipse。2.一种用于检测鸭腺病毒A型和鸭腺病毒2型的实时荧光定量PCR方法的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针。2CN107043831A说明书1/8页鸭腺病毒A型和2型RealtimePCR检测引物、探针及试剂盒技术领域[0001]本发明提供鸭腺病毒A型和鸭腺病毒2型实时荧光定量PCR检测引物、探针及试剂盒，属于兽医学领域。背景技术[0002]根据国际病毒分类委员会分类，腺病毒科Adenoviridae下设5个属，分别为富AT腺病毒属Atadenovirus、禽腺病毒属Aviadenovirus、鱼腺病毒属Ichtadenovirus、哺乳动物腺病毒属Mastadenovirus和唾液酸酶病毒属Siadenovirus。其中富AT腺病毒属有5个种，分别为牛腺病毒D型BovineadenovirusD、绵羊腺病毒D型OvineadenovirusD、袋鼠腺病毒A型PossumadenovirusA、蛇腺病毒A型SnakeadenovirusA和鸭腺病毒A型DuckadenovirusA（简称DAdV-A）。腺病毒基因组全长约为33kd，基因组为线性双链DNA；该类病毒颗粒为无囊膜的核衣壳呈二十面体对称，其中腺病毒的核衣壳有3个主要结构蛋白，分别为六邻体蛋白（Hexon）、纤维蛋白(Fiber)和五邻体蛋白（Penton）。其中，Hexon蛋白是腺病毒科各属病毒最主要的结构蛋白，每个Hexon蛋白表面携带有病毒主要的属的种特异性抗原决定簇，是病毒中和抗体的靶目标，含有病毒主要的保护性抗原基因簇，与病毒的致病性密切相关。[0003]鸭腺病毒2型（duckadenovirus2，DAdV-2）是近年来利用病毒宏基因组学发现的一种鸭源新型腺病毒，该病主要发生在20～30日龄鸭中，以肝和脾肿大、出血为主要特征，死亡率约为7％。核苷酸同源性分析比较发现，鸭腺病毒2型（GR株）和鸭腺病毒A型分离株的核苷酸同源性约为50.0%。通过对其基于Hexon蛋白的遗传进化分析发现，所有鸭腺病毒A型分离株在遗传进化上均处于相同的亚分支，且和绵羊腺病毒D型（OAV287株）均处于富AT腺病毒属遗传进化分支。但鸭腺病毒2型（GR株）和禽腺病毒A型Phelps株（鸡源）与P29株（鹅源）处于同一遗传进化分支，均属于禽腺病毒属遗传进化分支。[0004]实时荧光定量PCR方法（RealtimePCR）是一种