一种油分相关基因分子标记Indel6及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109825623A(43)申请公布日2019.05.31(21)申请号201910168673.0(22)申请日2019.03.06(71)申请人河南农业大学地址450000河南省郑州市郑东新区龙子湖高校区15号(72)发明人张丹董中东刘伟马兴立李忠锋(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人刘奇(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表2页附图1页(54)发明名称一种油分相关基因分子标记Indel6及其应用(57)摘要本发明提供了一种油分相关性状的功能分子标记Indel6及其应用，涉及分子标记技术领域。本发明所述油分相关性状的功能分子标记Indel6中，油分相关基因GmOLEO1位于大豆第20号染色体上，所述油分相关基因GmOLEO1的CDS序列如SEQIDNO.1所示，所述Indel6标记可用于分型和鉴定新的油分相关材料，并且用于对前期通过常规化学方法筛选的不同油分含量的大豆种质进行验证，正确率达到了85％以上。该方法较之常规的筛选方法省时，省力，节省成本，并具有很高的可靠性，为以后油分相关基因型种质鉴定和大豆品种育种分子标记辅助选择提供了新的材料和技术。CN109825623ACN109825623A权利要求书1/1页1.一种油分相关性状的功能分子标记Indel6，其特征在于，在大豆油分相关基因GmOLEO1的CDS起始位点ATG下游6bp处存在14bp的缺失，所述缺失的14bp序列如SEQIDNO.2所示；所述高油单倍型基因GmOLEO1的CDS序列如SEQIDNO.1所示。2.一种鉴定权利要求1所述功能分子标记Indel6的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。3.权利要求2所述引物对在鉴定大豆油分相关性状中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述鉴定的PCR程序包括：98℃预变性2min；98℃变性10s，60℃退火10s，72℃延伸3s，33个循环；72℃延伸1min，4℃保存。5.一种鉴定大豆油分相关性状的功能分子标记试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述引物对。2CN109825623A说明书1/4页一种油分相关基因分子标记Indel6及其应用技术领域[0001]本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种油分相关基因分子标记Indel6及其应用。背景技术[0002]大豆是我国重要的粮食作物和油料作物。但目前对外依存度已高达85％以上。因此，发掘大豆自身的遗传潜力，通过分子育种等技术手段培育高油大豆新品种是解决上述问题的有效途径。[0003]尽管大豆油分相关的研究也已取得很多进展，但在不同油分基因型的筛选上仍存在着一些困难，主要是因为油分含量必需以大豆籽粒样品进行测定，而籽粒样品具有季节性，而且油分含量在籽粒样品保存不当时会发生降解等变化，所以对大群体测定时不仅费时费力，还存在较大的误差。为了加快高油大豆育种进程，十分关键的问题是大豆种质含油量高低的准确鉴定，育种学家通常通过田间收获后，在实验室利用索氏抽提等常规的化学测定方法来鉴定大豆种质的粗脂肪含量，然而，这些方法在对大的群体进行选择时，尤其对于含油量这样数量性状具有一定的局限性。例如，数量性状受环境的影响很大，一两次的鉴定结果难以准确可靠，多年多点鉴定又费时费力，还必需有保存得当的种子才能测定。因此，准确、快速、简单地对大豆油分含量进行鉴定有利于提高油分相关育种进程。[0004]近年来，随着分子标记技术的发展，许多的研究者利用与油分相关QTL连锁的标记对大豆种质进行辅助选择，这种方法在一定的程度上提高了选择的速度，且操作简单，但是这些标记都是大豆油分基因的连锁标记，因此准确性一般较低。发明内容[0005]有鉴于此，本发明的目的在于油分相关基因分子标记及其鉴定引物对和应用，利用基因CDS本身进行分子标记，与油分相关基因GmOLEO1及其等位基因表现为共分离，可准确快速的鉴定大豆种质资源的油分品质，大大提高油分相关材料的选择效率和分型鉴定效率，加速油分相关分子标记辅助选择育种进程。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0007]本发明提供了一种油分相关性状的功能分子标记Indel6，在大豆油分相关基因GmOLEO1的CDS起始位点ATG下游6bp处存在14bp的缺失，所述缺失的14bp序列如SEQIDNO.2所示；所述高油单倍型基因GmOLEO1的CDS序列如SEQIDNO.1所示。[0008]本发明还提供了一种鉴定上述功能分子标记Indel6的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQID