一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110760473A(43)申请公布日2020.02.07(21)申请号201911204404.1(22)申请日2019.11.29(71)申请人东北农业大学地址150030黑龙江省哈尔滨市香坊区长江路600号(72)发明人刘忠华金君学孙婧陶姜超前王传玥张弛(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211代理人邓宇(51)Int.Cl.C12N5/075(2010.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用(57)摘要一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用，属于卵母细胞体外成熟培养技术领域。为了解决目前猪卵母细胞体外成熟率和发育率低的问题，本发明提供了一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用。本发明所述的培养液由基础培养液TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO3，4-羟乙基哌嗪乙磺酸，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，猪卵泡液，孕马血清促性腺激素，人绒毛膜促性腺激素和单宁酸组成。本发明所述的培养液，可以提高卵母细胞体外成熟质量、卵丘细胞扩散指数、孤雌胚胎囊胚率和囊胚总细胞数、体外受精胚胎卵裂率、囊胚率以及囊胚总细胞数。CN110760473ACN110760473A权利要求书1/1页1.一种猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述猪卵母细胞体外成熟培养液含有单宁酸。2.根据权利要求1所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述培养液由基础培养液TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO3，4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，猪卵泡液，孕马血清促性腺激素PMSG，人绒毛膜促性腺激素hCG和单宁酸组成。3.根据权利要求2所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述卵母细胞体外成熟培养液，以TCM-199为基准计，青霉素的质量浓度为0.048-0.066g/L，链霉素的质量浓度为0.08-0.12g/L，NaHCO3的浓度为1.95-2mmol/L，Hepes的浓度为9.5-10mmol/L，聚乙烯醇的质量浓度为2.5-3.5g/L，丙酮酸钠的浓度为0.9-0.95mmol/L，胰岛素的质量浓度为8-12ng/mL，半胱氨酸的浓度为0.5-0.7mmol/L，表皮生长因子的质量浓度为8-12ng/mL，猪卵泡液体积浓度为75-125mL/L，PMSG的浓度为8-12IU/mL，hCG的浓度为8-12IU/mL，单宁酸的浓度为1-50μg/mL。4.根据权利要求3所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述卵母细胞体外成熟培养液，以TCM-199为基准计，青霉素的质量浓度为0.06g/L，链霉素的质量浓度为0.1g/L，NaHCO3的浓度为1.99mmol/L，Hepes的浓度为9.8mmol/L，聚乙烯醇的质量浓度为3g/L，丙酮酸钠的浓度为0.91mmol/L，胰岛素的质量浓度为10ng/mL，半胱氨酸的浓度为0.6mmol/L，表皮生长因子的质量浓度为10ng/mL，猪卵泡液体积浓度为100mL/L，PMSG的浓度为10IU/mL，hCG的浓度为10IU/mL，单宁酸的浓度为10μg/mL。5.权利要求1-4任一所述的猪卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)猪卵泡液的获取：从猪卵巢的卵泡中抽出液体，对所述液体进行离心，保留上清液，对上清液进行过滤除杂，获得猪卵泡液；(2)将TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO3，Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，PMSG，hCG，单宁酸和步骤(1)所获得的猪卵泡液混合，获得培养液粗液；(3)对步骤(2)所获得的培养液粗液过滤除菌，获得所述的猪卵母细胞体外成熟培养液。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的猪卵巢温度是28-35℃。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的离心是4-6℃条件下，12000-14000r/min，离心30-60min。8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的过滤除杂是用0.45μm的滤器进行过滤。9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的过滤除菌是用0.22μm的滤器进行过滤。10.权利要求1-4任一所述的猪卵母细胞体外成熟培养液在体外培养猪卵母细胞上的应用。2CN110760473A说明书1/6页一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于卵母细胞体外成熟培养技术领域。具体涉及一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用。背景技术[0002]现