高效降解α-几丁质的融合几丁质酶及其相关生物材料与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113151226A(43)申请公布日2021.07.23(21)申请号202110459306.3C12N15/56(2006.01)(22)申请日2021.04.27C12P19/14(2006.01)C12P19/26(2006.01)(71)申请人中国农业科学院农业资源与农业区C12R1/19(2006.01)划研究所地址100081北京市海淀区中关村南大街12号(72)发明人顾金刚赵国刚吕晨茵姚伟张艾迪马锐(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人任凤华(51)Int.Cl.C12N9/42(2006.01)C12N9/24(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书2页说明书13页序列表5页附图7页(54)发明名称高效降解α-几丁质的融合几丁质酶及其相关生物材料与应用(57)摘要本发明公开了高效降解α‑几丁质的融合几丁质酶及其相关生物材料与应用。该融合几丁质酶为将β‑N‑乙酰己糖胺酶和几丁质酶融合在一起得到的几丁质酶活性高于所述β‑N‑乙酰己糖胺酶和所述几丁质酶的蛋白质；该几丁质酶为D1)或D2)：D1)氨基酸序列是SEQIDNo.2的第53‑322位氨基酸残基的蛋白质；D2)在D1)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白。该融合几丁质酶对多种类型的几丁质都有降解作用，对胶体几丁质、α‑几丁质和真菌细胞壁几丁质都有较高的活性；具有完全水解几丁质，产生N‑乙酰葡萄糖胺的能力。本发明可广泛用于生物医药、生物农业、生物农业、化妆品、能源工业等。CN113151226ACN113151226A权利要求书1/2页1.融合蛋白质，其特征在于：所述融合蛋白质为将β‑N‑乙酰己糖胺酶和几丁质酶融合在一起得到的几丁质酶活性高于所述β‑N‑乙酰己糖胺酶和所述几丁质酶的蛋白质；所述几丁质酶为D1)或D2)的蛋白质：D1)氨基酸序列是SEQIDNo.2的第53‑322位氨基酸残基的蛋白质；D2)在D1)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的融合蛋白质，其特征在于：所述β‑N‑乙酰己糖胺酶来源于链霉菌。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白质，其特征在于：所述β‑N‑乙酰己糖胺酶为A1)或A2)的蛋白质：A1)氨基酸序列是SEQIDNo.2的第323‑833位氨基酸残基的蛋白质；A2)在A1)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白。4.根据权利要求1至3种任一所述的融合蛋白质，其特征在于：所述融合蛋白质为F1)‑F3)中的任一蛋白质：F1)氨基酸序列是SEQIDNo.2的蛋白质；F2)氨基酸序列是SEQIDNo.2的第53‑833位的蛋白质；F3)将F1)或F2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白。5.与权利要求1‑4中任一所述融合蛋白质相关的生物材料，为下述B1)‑B7)中至少一种：B1)编码权利要求1‑4中任一所述融合蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系、或含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织、或含有B3)所述重组载体的转基因植物组织；B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官、或含有B3)所述重组载体的转基因植物器官。6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下B11)或B12)：B11)编码序列是SEQIDNo.1的DNA分子；B12)核苷酸序列是SEQIDNo.1的第157‑2499位的DNA分子。7.一种制备融合蛋白质的方法，包括：使权利要求1‑4中任一所述融合蛋白质的编码基因在生物中进行表达，得到所述融合蛋白质；所述生物为微生物、植物或非人动物。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述微生物为C1)‑C4)中的任一种:C1)原核微生物；C2)肠杆菌科细菌；C3)埃希氏菌属细菌；C4)大肠杆菌。2CN113151226A权利要求书2/2页9.权利要求1‑4中任一所述融合蛋白质在作为几丁质酶中的应用、或在水解几丁质中的应用。10.权利要求1‑4中任一所述融合蛋白质、权利要求5或6所述的生物材料、权利要求7或8所述的方法在制备几丁质酶制剂中的应用。3CN1