稻瘟病抗性基因Pik-zh的功能特异性分子标记与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113789404A(43)申请公布日2021.12.14(21)申请号202111045221.7(22)申请日2021.09.07(71)申请人福建省农业科学院水稻研究所地址350019福建省福州市仓山区城门乡连坂村(72)发明人杨德卫何旎清郑向华黄凤凰程朝平叶宁(74)专利代理机构福州科扬专利事务所(普通合伙)35001代理人郭梦羽(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/29(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表4页附图1页(54)发明名称稻瘟病抗性基因Pik-zh的功能特异性分子标记与应用(57)摘要本发明公开稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记与应用，稻瘟病抗性基因Pik‑zh功能特异性分子标记为Pik‑zh‑InDel，通过引物对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2从携带有稻瘟病抗性基因Pik‑zh的水稻品种的基因组DNA中扩增出来与稻瘟病抗性基因Pik‑zh呈特异性带型的分子标记；其中，SEQIDNO.1为5’‑AGCAGTGGGACGAGTGGGA‑3’；SEQIDNO.2为5’‑GGTAGGACACCTGCCATCA‑3’；本发明获得的稻瘟病抗病基因Pik‑zh的功能特异性分子能够应用于鉴别水稻品种中稻瘟病抗性基因。CN113789404ACN113789404A权利要求书1/1页1.稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记，其特征在于：稻瘟病抗性基因Pik‑zh功能特异性分子标记为Pik‑zh‑InDel，通过引物对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2从携带有稻瘟病抗性基因Pik‑zh的水稻品种的基因组DNA中扩增出来与稻瘟病抗性基因Pik‑zh呈特异性带型的分子标记；其中，所述引物对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2的核苷酸序列如下所示：SEQIDNO.1：5’‑ACGAGTGGGATCGATACTG‑3’；SEQIDNO.2：5’‑GGTAGGACACCTGCCATCA‑3’；所述携带有稻瘟病抗性基因Pik‑zh的水稻品种为水稻抗病品种中花11。2.如权利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记，其特征在于：所述稻瘟病抗性基因Pik‑zh包括部分编码NBS‑LRR类蛋白的基因片段SEQIDNO.3。3.如权利要求1至2任一所述的稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)针对稻瘟病抗性基因Pik‑zh位点进行序列比对，筛查Pik‑zh特异的、能区别于该位点其他稻瘟病等位抗性基因的插入/缺失InDel位点；(2)利用步骤(1)获得的InDel位点信息，在所述InDel位点处设计基因特异性引物；(3)以携带有稻瘟病抗性基因Pik‑zh的稻瘟病抗性品种的总DNA为模板，进行PCR扩增，所获得的PCR产物即为稻瘟病抗性基因Pik‑zh基因特异性分子标记Pik‑zh‑InDel。4.如权利要求1至2任一所述的稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记在鉴别水稻品种稻瘟病抗性基因的应用。5.用于鉴别水稻品种稻瘟病抗性的试剂盒，其特征在于：包括核酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的引物对。2CN113789404A说明书1/5页稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子标记与应用技术领域[0001]本发明属于生物分子标记技术领域，具体涉及稻瘟病抗性基因Pik‑zh的功能特异性分子与应用。背景技术[0002]水稻是世界上主要的粮食作物之一，由稻瘟病菌引起的稻瘟病是一种世界性病害，近年来呈现不断上升的趋势。稻瘟病不仅引起水稻大幅减产(10％‑35％)，严重时甚至颗粒无收，还会影响稻米品质。从粮食安全和水稻抗病育种的角度来看，培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的方法之一。但由于传统的抗病育种策略存在工作量大，周期长等特点。因此，迫切需要改变传统抗病育种的策略。[0003]DNA分子标记是以生物大分子的多态性为基础而发展起来的一种遗传标记，目前已经应用于基因组作图、基因定位、遗传多样性评价、功能基因组学研究、转基因植物鉴定与分子标记辅助选择育种等方面。基因功能特异性分子标记是利用目标基因内部DNA序列特异性、差异性而开发出来的分子标记。基因特性分子标记是从目标功能基因序列中功能性SNP位点或InDels开发的功能分子标记，能准确跟踪、定位功能等位基因，在作物表型性状的鉴定中更具准确性，能高效率地筛选出育种所需的有利基因。[0004]20世纪60年代，日本率先开展了水稻品种抗稻瘟病基因分析的研究工作，鉴定了最初8个抗性位点上