重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114306589A(43)申请公布日2022.04.12(21)申请号202210024618.6C12N15/62(2006.01)(22)申请日2022.01.11A61P31/20(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所地址730000甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪1号(72)发明人邵军军张光磊刘伟梁霞霞常惠芸(74)专利代理机构洛阳公信知识产权事务所(普通合伙)41120代理人王艳艳(51)Int.Cl.A61K39/295(2006.01)A61K39/12(2006.01)A61K39/39(2006.01)C07K19/00(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表7页附图6页(54)发明名称重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗及应用(57)摘要本发明涉及重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗及其应用，属于生物技术制药领域，所述的“鸡尾酒”疫苗是由重组蛋白p30‑modifiedp54、p72epitope‑pE248R的N段氨基酸序列和CD2v的N段氨基酸序列‑pEP153R的C段氨基酸序列3种成分与佐剂配伍制成。本发明提供了上述3种重组蛋白的表达和纯化方法，以及用于配制上述“鸡尾酒”疫苗各重组蛋白的比例和佐剂。本发明研制的“鸡尾酒”疫苗免疫猪可激发机体产生中和抗体和细胞免疫，是一种非常有应用前景的非洲猪瘟亚单位疫苗。CN114306589ACN114306589A权利要求书1/1页1.一种重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：所述“鸡尾酒”疫苗以三种重组ASFV抗原融合蛋白PM、PPE和CPE中的两种或两种以上作为活性成分；所述PM由ASFVp30和修饰的p54通过Linker融合而成，通式为p30‑(Linker)3‑mp54；所述PPE由ASFVp72的4个已验证抗原表位和pE248R的N段氨基酸序列通过Linker融合而成，通式为p72抗原表位1‑(Linker)3‑p72抗原表位2‑(Linker)3‑p72抗原表位3‑(Linker)3‑p72抗原表位4‑(Linker)3‑pE248R的N段氨基酸序列；所述CPE由CD2v的N段氨基酸序列和pEP153RC段氨基酸序列通过Linker融合而成，通式为：CD2v的N段氨基酸序列‑(Linker)2‑pEP153R的C段氨基酸序列；其中，所述Linker序列为GGGGS。2.根据权利要求1所述的“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：所述PM的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示；所述PPE的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示；所述CPE的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示。3.根据权利要求2所述的“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：编码所述PM的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；编码所述PPE的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；编码所述CPE的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。4.根据权利要求1或2所述的“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：所述“鸡尾酒”疫苗是以三种重组ASFV抗原融合蛋白PM、PPE和CPE作为活性成分。5.根据权利要求4所述的“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：所述“鸡尾酒”疫苗还包括佐剂，是将PM、PPE和CPE混合后与佐剂配伍后制得。6.根据权利要求5所述的“鸡尾酒”疫苗，其特征在于：三种所述重组ASFV抗原融合蛋白PM、PPE和CPE按照1：1：2的质量比混合，得抗原混合物，然后将所述抗原混合物与等质量的ISA206佐剂乳化成“鸡尾酒”疫苗。7.根据权利要求1所述的“鸡尾酒”疫苗在制备治疗/预防非洲猪瘟病毒感染的药物方面的应用。2CN114306589A说明书1/7页重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗及应用技术领域[0001]本发明属于生物技术制药领域，具体涉及一种重组非洲猪瘟病毒抗原“鸡尾酒”疫苗及应用。背景技术[0002]非洲猪瘟（Africanswinefever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（Africanswinefevervirus,ASFV）引起猪发病的急性烈性传染病，死亡率可达100%，目前无商品化疫苗可供使用。世界动物卫生组织（WorldOrganizationforAnimalHealth,OIE）将其列为将其列为必须通报的动物疫病，我国将其列为重点防控的一类动物传染病。自从ASFV被发现以来，对疫苗的研究从来没有停止，但由于病毒基因组庞大，编码的蛋白众多且结构复杂，免疫与感染机理不清，至今没有安全有效的疫苗可供使用。ASF疫苗的研究表明：（1）ASF灭活疫苗不能提供免疫保护；（2）ASF减毒活疫苗能保护同源或异源毒株感染，但会引起不良反应，而且存在毒力回复的风险。（3）ASF亚单位疫苗能诱导产生中和抗体，但免疫保护效果并不理想，需