一种精液保护液及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114304136A(43)申请公布日2022.04.12(21)申请号202111496761.7(22)申请日2021.12.09(71)申请人北京大北农动物保健科技有限责任公司地址101407北京市怀柔区雁栖经济开发区北三街10号申请人韶山大北农动物药业有限公司北京大北农科技集团股份有限公司(72)发明人单丽倩刘澜卢贵梅(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种精液保护液及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种用于改善精液冷冻后品质的精液保护液及其制备方法与应用。该精液保护液含有活性成分，所述活性成分由红景天多糖、黄芪多糖制成。本发明精液保护液具有抗氧化、提高冷冻精子存活率等功效，可有效用于精液冷冻的保护，能有效提高解冻后精子的质膜完整率、精子活力、DNA完整率、顶体完整率等，提高精液冷冻后的品质。具有原料来源广泛、安全、环保、制备工艺简单、生产成本低等诸多优点。CN114304136ACN114304136A权利要求书1/1页1.一种精液保护液，其特征在于，该精液保护液由精液储存液和中药组合物制成，所述精液储存液由葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素制成，中药组合物由红景天多糖、黄芪多糖制成。2.根据权利要求1所述的精液保护液，其特征在于，所述储存液活性成分为每1L双蒸水中含有葡萄糖15～17g，柠檬酸19～21g，三羟甲基氨基甲烷34～36g，青霉素、链霉素各1×106IU。3.根据权利要求2所述的精液保护液，其特征在于，所述储存液活性成分为每1L双蒸水中含有葡萄糖16g，柠檬酸20g，三羟甲基氨基甲烷35g，青霉素、链霉素各1×106IU。4.根据权利要求1‑3任一项所述的精液保护液，其特征在于，所述储存液pH值为7.2～7.4，渗透压为300～320mOsm/L。5.根据权利要求1所述的精液保护液，其特征在于，所述中药组合物活性成分为每1L双蒸水中含有红景天多糖0.9‑1.1g、黄芪多糖0.5‑0.7g。6.根据权利要求5所述的精液保护液，其特征在于，所述中药组合物活性成分为每1L双蒸水中含有红景天多糖1.0g、黄芪多糖0.6g。7.利用权利要求1～6任意一项所述的精液保护液进行动物精液保存的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将采集后的合格精子用精液储存液稀释，25℃平衡处理1h，15℃平衡处理1h，期间不定时混匀；(2)将精液离心，弃去上清液，加入所述的精液保护液，调整精子终浓度为3.2～4.8×108个/mL，重悬后5℃平衡处理1h；(3)混匀后的精液灌装于细管中，封口，然后将细管梯度降温至‑6℃，置于液氮上方3cm处熏蒸3min，最后投于液氮，保存。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中调整精子终浓度为4×108个/mL。9.权利要求1～6任意一项所述的精液保护液在动物精液存储冷冻保护中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述动物精液为畜类动物的精液，包括但不限于猪、牛、羊、马。2CN114304136A说明书1/7页一种精液保护液及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于动物遗传育种领域，特别涉及一种用于改善精液冷冻后品质的精液保护液及其制备方法与应用。背景技术[0002]随着人工授精技术的发展，精液的冷冻保存技术是哺乳动物育种的重要生物技术手段之一，可以有效降低饲养成本，使精液使用不受时间、地点和使用对象的限制，显著增加优良种畜精液的使用时间和利用率，包括取样、稀释、降温、冷冻等一系列复杂的过程。但由于冷冻精液生产存在困难大、冷冻‑解冻后活率及受胎率低等诸多原因，导致精液冷冻技术仍未完全成熟。在冷冻‑解冻的过程中，会对精液造成一定损伤，损伤机制可以分为物理损伤和化学损伤。物理损伤为冷冻产生的冰晶对细胞膜和细胞内部结构产生机械性损伤。冰晶化导致的溶液效应所致一系列损伤为化学损伤：精子细胞内氧化还原平衡被打破，正常生理代谢产生的活性氧(ROS)大量堆积，无法经反应中和，很容易与精子细胞膜上的磷脂发生氧化反应，还会降低细胞内酶类物质的活性，降低运动性，甚至破坏细胞核中的DNA，从而导致精子的受精能力下降。[0003]精液保护液多以减少冰晶和抗氧化为目的，近年来，现有技术对影响冻存精子质量的外部条件有了详细的研究，可以在冷冻过程中控制外部条件保持在适宜范围内，将外部条件造成的影响降到最低，关于内部损伤的研究，目前市场上已有的产品以添加卵黄等渗入性保护剂为主，但存在动物源成分复杂，安全性低等顾虑。多糖具有的抗氧化性、抗衰老和防止细胞凋亡的特性，其抑制了活性氧的产生，提高了过氧化物酶的活性，使细胞质膜免受脂质过氧化损伤