一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114752571A(43)申请公布日2022.07.15(21)申请号202111465369.6A01P1/00(2006.01)(22)申请日2021.12.03(83)生物保藏信息CCTCCM202113302021.10.27(71)申请人湖北省农业科学院经济作物研究所地址430073湖北省武汉市洪山区南湖大道43号(72)发明人董朝霞于翠朱志贤莫荣利张成(74)专利代理机构深圳紫晴专利代理事务所(普通合伙)44646专利代理师付钦伟(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)A01N63/40(2020.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用(57)摘要本发明涉及生物防治技术领域，公开了一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用。青枯病菌噬菌体MulY4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM20211330。噬菌体MulY4对青枯病菌具有较强的侵染活性，稳定性强，安全性好，为青枯病的防治提供了一种有效方案。CN114752571ACN114752571A权利要求书1/1页1.一种桑树青枯病菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为CaudoviralesphageMulY4，保藏编号为CCTCCM20211330。2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体MulY4基因组的全长为52699bp，G+C含量为49.4％，其末端为166bp的正向重复序列。3.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体属于Caudovirales目噬菌体。4.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述的噬菌体，以及可接受的载体。5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，还包括一种或多种与权利要求1～3任意一项所述噬菌体不同的桑树青枯病菌噬菌体。6.根据权利要求4或5所述的药物制剂，其特征在于，所述噬菌体为青枯病菌裂解液的粗提物或纯化物。7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述裂解液粗提物或纯化物经冷冻干燥、或溶于适当溶媒中。8.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的pH为5～9。9.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的保存温度在28℃以下。10.权利要求1～3任意一项所述的噬菌体，以及权利要求4～9任意一项所述的药物制剂在拮抗青枯病病原菌中的应用。2CN114752571A说明书1/6页一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物防治领域，具体地涉及一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用。背景技术[0002]桑树是一种落叶乔木，属蔷薇目(Urticales)、桑科(Moraceae)、桑属(Morus)、桑种(Morusalba)，广泛分布在世界各地。在我国，桑树的自然分布和人工栽培更是遍及全国各地，我国也是世界上桑树品种资源最丰富的国家。在桑树栽培过程中，极易受到青枯病的危害，危害严重。[0003]造成植物青枯病的是一种土传的植物病原细菌，主要分布在热带、亚热带及部分暖温带地区，感染植物涉及范围广泛。通过伤口、根尖或者次生根萌发处侵入植物，定殖在根部皮层迅速繁殖，并进入维管束继续向其它组织蔓延。同时分泌果胶酶、纤维素酶等分解植物的中胶层，导致植物枯萎直至死亡。青枯病是危害最大、分布最广、造成损失最严重的植物细菌病害之一，该病害堪称“植物癌症”，一旦发病就难以控制，造成的经济损失难以估量。[0004]对于青枯病的防治国内外已有大量的探索，提出了多种防治措施，包括化学防治、物理防治、改进农业栽培方式以及生物防治等等。如使用化学熏蒸剂和抗生素处理土壤，种植抗病品种、作物轮作和套种，利用无致病力青枯病菌菌株、芽胞杆菌、链霉菌等生防菌等等(Yuliaretal.,2015)。虽然这些防治措施有一定效果，但是并不稳定，而且化学农药的残留对土壤和水污染严重，危害人畜健康，细菌也极易对抗生素产生耐药性，生防菌不能在土壤中稳定定殖，并且其生产、储藏和使用都有一定难度。因此，开发新型防治技术势在必行。[0005]近年来，利用噬菌体疗法防控细菌性病害引起了研究者的广泛关注。噬菌体是一类能够侵染细菌的病毒，做为细菌的“捕食者”，可直接被用于防控病原菌。Yen等人证实噬菌体鸡尾酒疗法可抑制霍乱弧菌在小鼠和兔子体内的定殖，有效缓解该菌引起的腹泻症状(Yenetal.,2017)。近年来，利用噬菌体防治植物病原细菌的报道也越来越多，田间试验结果显示噬菌体对丁香假单胞菌、链霉菌、苛养木杆菌、解淀粉欧文氏菌和黑胫病菌等植物病原菌都有很好的防治效果(Buttimeretal.,2017)。也发现青枯病菌噬菌体ФRSL1和PE204等可显著降低番茄青枯病的发病率