一种花生青枯菌效应蛋白RipW及其在花生抗青枯病中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115028693A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210263587.XC12N15/53(2006.01)(22)申请日2022.03.17C12N15/64(2006.01)C12N15/70(2006.01)(71)申请人福建农林大学A01G22/40(2018.01)地址350002福建省福州市仓山区上下店A01N63/20(2020.01)路15号福建农林大学A01P1/00(2006.01)(72)发明人陈华陈坤庄伟建张冲庄宇慧蔡铁城杨强唐荣华李华奇(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100专利代理师彭琴蔡学俊(51)Int.Cl.C07K14/34(2006.01)C12N15/31(2006.01)C12N9/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表8页附图2页(54)发明名称一种花生青枯菌效应蛋白RipW及其在花生抗青枯病中的应用(57)摘要本发明提供一种花生青枯菌效应蛋白RipW及其在花生抗青枯病中的应用，属于植物病理和作物病害防治技术领域。花生青枯菌效应蛋白RipW的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，其编码基因核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。敲除RipW后，能够显著降低Rs‑P.362200对花生的致病性，表明RipW作为一个毒力因子，在花生致病过程中发挥着重要的作用。根据酵母双杂交方法，在花生受青枯菌诱导的cDNA文库中筛选到了RipW的靶蛋白AhPOA，其基因核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，蛋白序列如SEQIDNo.4所示。本发明在揭示花生青枯菌致病机理以及花生青枯病的防治方面具有重要的应用价值。CN115028693ACN115028693A权利要求书1/1页1.一种花生青枯菌三型效应蛋白RipW，其特征在于：所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种花生青枯菌三型效应蛋白RipW的编码基因，其特征在于：所述编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。3.一种包含权利要求2所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW编码基因的超量表达载体。4.一种包含权利要求2所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW编码基因的敲除载体。5.根据权利要求4所述敲除载体，其特征在于：所述敲除载体的构建方法包括：根据花生青枯菌Rs‑P.362200全基因序列,克隆RipW上游524bp片段U，下游519bp片段D；通过酶切连接的方法构建敲除载体pK18mobSacB‑U‑D。6.一种包含权利要求2所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW编码基因的回补载体。7.根据权利要求6所述的回补载体，其特征在于：所述回补载体的构建方法包括：根据花生青枯菌Rs‑P.362200全基因序列,克隆上游524bp片段U、1146bp的RipW、下游519bp片段D；通过酶切连接的方法构建回补载体pK18mobSacB‑U‑RipW‑D。8.一种权利要求1所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW的互作蛋白AhPOA，其特征在于：所述互作蛋白AhPOA为多酚氧化酶AhPOA，其氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。9.权利要求1所述花生青枯菌三型效应蛋白RipW在青枯菌防治中的应用。10.权利要求8所述上述花生青枯菌三型效应蛋白RipW的互作蛋白AhPOA在青枯菌防治中的应用。2CN115028693A说明书1/5页一种花生青枯菌效应蛋白RipW及其在花生抗青枯病中的应用技术领域[0001]本发明属于植物病理和作物病害防治技术领域，具体公开了一种花生青枯菌效应蛋白RipW及其在花生抗青枯病中的应用。背景技术[0002]青枯菌（Ralstoniasolanacearum）又称青枯雷尔氏菌，是一种革兰氏阴性棒状杆菌，其引起的青枯病是世界上最为广泛的细菌性病害之一。该病原体能够感染200多种植物，包括花生、马铃薯、番茄、烟草、拟南芥和许多观赏性植物。青枯菌的生命力非常顽强，在没有营养物质的超纯水中，可以数年不改变其致病力，这种现象是很罕见的，这可能是青枯病能够在世界范围内广泛传播的原因之一。青枯菌的毒力因子有很多，在众多毒力因子中，由三型分泌系统分泌的三型效应蛋白是主要的毒力决定因子。[0003]花生是世界上四大油料作物之一，是我国多用途加工利用的油、食兼用的重要农作物。国家统计局数据表明，我国花生种植面积占世界总量的1/4，而产量占世界花生产量的43%，然而我国的油料作物产品长期处于短缺状态，年进口油料已达7140万吨，食用植物油对外依存度高达2/3以上。因此，我国花生产业的发展对保障我国食用油安全具有举足轻重的作用，国家高度重视花生等油料作物的生产。由青枯菌引起