一种分离的桑树青枯病菌噬菌体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115851615A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211128093.7A01P1/00(2006.01)(22)申请日2022.09.16(83)生物保藏信息CCTCCM202211422022.07.21(71)申请人湖北省农业科学院经济作物研究所地址430070湖北省武汉市洪山区南湖大道43号(72)发明人董朝霞于翠张成莫荣利朱志贤(74)专利代理机构北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙)11390专利代理师申龙华(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)A01N63/40(2020.01)权利要求书1页说明书9页附图3页(54)发明名称一种分离的桑树青枯病菌噬菌体及其应用(57)摘要本发明涉及生物防治技术领域，公开了一种分离的桑树青枯病菌噬菌体及其应用。青枯病菌噬菌体Mulvp2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM20221142。噬菌体Mulvp2对青枯病菌具有强的裂解活性，在37℃以下的中性环境中均能稳定存在，安全性好，为青枯病的防治提供了一种有效方案。CN115851615ACN115851615A权利要求书1/1页1.一种桑树青枯病菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为CaudoviralesphageMulvp2，保藏编号为CCTCCM20221142。2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体Mulvp2基因组的全长为58604bp，G+C含量为50.24％，编码72个ORF。3.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体不包含溶源‑裂解控制相关基因，是烈性噬菌体。4.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述的噬菌体，以及可接受的载体。5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，还包括一种或多种与权利要求1～3任意一项所述噬菌体不同的桑树青枯病菌噬菌体。6.根据权利要求4或5所述的药物制剂，其特征在于，所述噬菌体为青枯病菌裂解液的粗提物或纯化物。7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述裂解液粗提物或纯化物经冷冻干燥、或溶于适当溶媒中。8.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的pH为5～9。9.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的保存温度在37℃以下。10.权利要求1～3任意一项所述的噬菌体，以及权利要求4～9任意一项所述的药物制剂在拮抗青枯病病原菌中的应用。2CN115851615A说明书1/9页一种分离的桑树青枯病菌噬菌体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物防治领域，具体地涉及一种分离的桑树青枯病菌噬菌体及其应用。背景技术[0002]桑树是一种落叶乔木，属蔷薇目(Urticales)、桑科(Moraceae)、桑属(Morus)，桑种(Morusalba)，广泛分布在世界各地，在我国，桑树的自然分布和人工栽培更是遍及全国各地，我国也是世界上桑树品种资源最丰富的国家。在桑树栽培过程中，极易受到青枯病的危害，造成桑园大量缺株，面积骤减，桑叶产量大幅下降，对蚕桑产业的稳定和可持续发展造成威胁。[0003]青枯病是一种世界性的植物细菌病害，被认为是“植物的癌症”，严重威胁着多种农作物及重要经济作物的生长。造成植物青枯病的是一种土传的植物病原细菌，主要分布在热带、亚热带及部分暖温带地区。青枯病菌通过伤口、根尖或者次生根萌发处侵入植物，定殖在根部皮层迅速繁殖，并进入维管束继续向其它组织蔓延。同时分泌果胶酶、纤维素酶等分解植物的中胶层，导致植物枯萎直至死亡。[0004]青枯病菌生命力强，在湿润的土壤以及有水的微环境中可以存活多年，并随着水的流动而传播，给植物种植和农业生产带来巨大隐患。因此，由青枯病菌引起的植物青枯病的防治面临着严峻的挑战。对于青枯病的防治国内外已有大量的探索，提出了多种防治措施，包括化学防治、物理防治、改进农业栽培方式以及生物防治等等。如使用化学熏蒸剂和抗生素处理土壤，种植抗病品种、作物轮作和套种，利用无致病力青枯病菌菌株、芽胞杆菌、链霉菌等生防菌等等(Yuliaretal.,2015)。虽然这些防治措施有一定效果，但是并不稳定，而且化学农药的残留对土壤和水污染严重，危害人畜健康，细菌也极易对抗生素产生耐药性，生防菌不能在土壤中稳定定殖，并且其生产、储藏和使用都有一定难度。因此，开发新型防治技术势在必行。[0005]近年来，利用噬菌体疗法防控细菌性病害引起了研究者的广泛关注。噬菌体是一类能够侵染细菌的病毒，做为细菌的“捕食者”，可直接被用于防控病原菌。Yen等人证实噬菌体鸡尾酒疗法可抑制霍乱弧菌在小鼠和兔子体内的定殖，有效缓解该菌引起的腹泻症状(Yenetal.,2017)。近年来，利用噬菌