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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114773448A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210421072.8A23C11/00(2006.01)(22)申请日2022.04.20C12R1/84(2006.01)(71)申请人中国农业科学院生物技术研究所地址100081北京市海淀区中关村南大街12号(72)发明人林敏周正富张维张瑞雪庞雨(74)专利代理机构北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)11447专利代理师耿超(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N15/12(2006.01)C12N1/19(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表6页附图2页(54)发明名称重组κ-酪蛋白及其制备方法和人造乳(57)摘要本发明提供了人工设计构建κ‑酪蛋白的方法,通过计算机辅助分析乳蛋白的表面可及性与抗原指数氨基酸区域,结合乳蛋白晶体结构数据与Schema同源结构域重组策略构建低致敏性优良κ‑酪蛋白分子。实验结果表明,本发明获得降低致敏原的优化乳蛋白分子,实现靶标κ‑酪蛋白全局优化与高效合成。CN114773448ACN114773448A权利要求书1/1页1.一种重组κ‑酪蛋白,其特征在于,所述重组κ‑酪蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述的重组κ‑酪蛋白的基因。3.根据权利要求2所述的基因,其中,所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.一种重组表达载体,其特征在于,该重组表达载体插入有权利要求2或3所述的基因并形成表达权利要求1所述的重组κ‑酪蛋白的表达框。5.根据权利要求4所述的重组表达载体,其中,所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。6.一种转化体,其特征在于,所述转化体导入有权利要求4或5所述的重组表达载体。7.根据权利要求5所述的转化体,其中,所述转化体的宿主为毕赤酵母。8.一种制备权利要求1所述重组κ‑酪蛋白的方法,其特征在于,该方法包括:将权利要求6或7所述的转化体进行培养,得到培养后的物料,并且从所述培养后的物料中纯化所述重组κ‑酪蛋白。9.根据权利要求8所述的方法,其中,所述培养的条件包括:培养基的成分包括5‑20g/L的酵母提取物、10‑30g/L的蛋白胨、1‑2g/L的无氨基酵母氮源、0.2‑0.6mg/L的生物素和2‑10mL/L的甲醇;培养的温度为25‑35℃、时间为60‑90小时。10.一种人造乳,其特征在于,所述人造乳含有蛋白质和水,所述蛋白质包括权利要求1所述的重组κ‑酪蛋白。2CN114773448A说明书1/4页重组κ‑酪蛋白及其制备方法和人造乳技术领域[0001]本申请涉及生物技术领域,具体地,涉及一种重组κ‑酪蛋白、编码该重组κ‑酪蛋白的基因、插入有该基因的重组表达载体、导入有该重组表达载体的转化体、制备该重组κ‑酪蛋白的方法以及一种人造乳。背景技术[0002]目前,乳制品的需求量不断增加,天然动物奶及其乳制品是最理想的蛋白营养来源,其营养成分主要是乳蛋白,同时还含有生物活性肽、脂肪、乳糖、维生素和矿物质等。[0003]但是,因含有各种致敏原,天然动物奶是婴幼儿群体中排在首位的致敏源食物。牛奶及其乳制品是FAO和WHO认定的导致人类食物过敏的主要食品之一。目前,牛奶中已知的主要致敏原包括αS1‑酪蛋白、αS2‑酪蛋白、β‑酪蛋白、κ‑酪蛋白、β乳球蛋白和β‑酪蛋白等。[0004]目前,牛乳过敏人群中约有65%对酪蛋白过敏,野生型的κ‑酪蛋白仍然具有较高的致过敏性。发明内容[0005]本发明的目的在于降低κ‑酪蛋白的致过敏性。[0006]本发明的发明人通过对κ‑酪蛋白的序列和晶体结构进行分析,基于多序列比对和系统发育分析,利用同源结构元件交叉重组策略对乳蛋白按功能域分割与创建重组蛋白文库,替换或消除致敏序列和表观位点,计算蛋白分子自由能稳定系数,完成乳蛋白进行理性设计与定向进化,实现基于应用属性的乳蛋白序列全局优化,得到了具有较低致过敏性的κ‑酪蛋白。[0007]为了实现上述目的,本发明提供了一种重组κ‑酪蛋白,所述重组κ‑酪蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。[0008]本发明还提供了编码如上所述的重组κ‑酪蛋白的基因。[0009]可选地,其中,所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。[0010]本发明还提供了一种重组表达载体,该重组表达载体插入有如上所述的基因并形成表达如上所述的重组κ‑酪蛋白的表达框。[0011]可选地,其中,所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。[0012]本发明还提供了一种转化体,所述转化体导入有如上所述的重组表达载体。[0013]可选地,其中,所述转化体的宿主为毕