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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114836468A(43)申请公布日2022.08.02(21)申请号202210580191.8(22)申请日2022.05.25(71)申请人东北林业大学地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号(72)发明人于颖王超石晶静高岩张嘉薇王荣国苏丽红(74)专利代理机构哈尔滨市晨晟知识产权代理有限公司23219专利代理师宫晓平(51)Int.Cl.C12N15/84(2006.01)A01H5/06(2018.01)A01H6/00(2018.01)A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图7页(54)发明名称一种高效的白桦根转基因方法(57)摘要本发明涉及一种高效的白桦根转基因方法,属于植物转基因技术领域。为解决现有白桦转基因体系外植体培养周期长、转化周期长、效率低的问题,本发明提供了一种高效的白桦根转基因方法,选取具有根蘖繁殖能力的白桦根作为转基因材料,经过白桦根的培养、携带目的基因的农杆菌遗传转化、共培养诱导愈伤组织形成,抗性筛选诱导不定芽的形成,最终通过诱导形成完整的植株。本发明与现有白桦转基因方法相比,缩短了转化周期,提高了转化效率,避免了外植体选择的困难,统一了转基因子代植株的遗传背景,提高了材料的使用率,进一步解决了脱菌难的问题。本发明提供的高效的白桦根转基因方法操作简单,易于掌握。CN114836468ACN114836468A权利要求书1/1页1.一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,将白桦组培苗根部置于转化液中,所述转化液中含有携带目的基因的农杆菌;在转化液浸泡条件下将白桦组培苗根切段侵染,侵染完成后将所得根段置于共培养培养基中进行暗培养,暗培养完成后将根段移至愈伤筛选培养基中,光照条件下进行愈伤培养得到愈伤组织,将所得愈伤组织转移至分化筛选培养基中进行分化培养及筛选得到不定芽,将所得不定芽转移至生根筛选培养基中进行不定芽生根诱导培养及筛选,对生根筛选培养基中正常生长的白桦苗进行分子鉴定,鉴定正确后即为稳定转化的转基因白桦植株。2.根据权利要求1所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述白桦组培苗根部是将组培白桦苗微扦插于生根培养基中室温条件下生根培养1~2月得到,所述生根培养基是在1/2MS培养基的基础上增加20g/L蔗糖、0.2mg/L的NAA、0.4g/L的碳粉和6g/L的琼脂配制而成,pH为5.8‑6.2。3.根据权利要求1或2所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述转化液是在1/2MS培养基的基础上增加20g/L蔗糖、150μM的AS和0.02%的tween‑20配制而成,pH为5.8‑6.2。4.根据权利要求3所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述转化液中农杆菌的OD600为0.6‑0.8。5.根据权利要求4所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述白桦组培苗根部切段侵染是将白桦组培苗根部在转化液浸泡条件下切成1cm长的根段,侵染5~10min。6.根据权利要求5所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述共培养培养基是在WPM培养基的基础上增加20g/L蔗糖、0.02mg/L的NAA、0.8mg/L的6‑BA、0.5mg/L的GA3和6g/L的琼脂配制而成,pH为5.8‑6.2;所述根段置于共培养培养基中暗培养是在室温条件下暗培养为3~4天。7.根据权利要求6所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述光照条件为室温条件下14h光照和10h黑暗交替培养,光照强度为500mmol/m2·s,所述愈伤培养的时间为14~30d。8.根据权利要求7所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述愈伤筛选培养基是在WPM培养基的基础上增加20g/L蔗糖、0.02mg/L的NAA、0.8mg/L的6‑BA、0.5mg/L的GA3、250mg/L的头孢霉素、50mg/L的卡那霉素和6g/L的琼脂配制而成,pH为5.8‑6.2。9.根据权利要求8所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述分化筛选培养基是在WPM培养基的基础上增加20g/L蔗糖、1mg/L的6‑BA、250mg/L的头孢霉素、50mg/L的卡那霉素和6g/L的琼脂配制而成,pH为5.8‑6.2。10.根据权利要求9所述一种高效的白桦根转基因方法,其特征在于,所述生根筛选培养基是在1/2MS培养基的基础上增加20g/L蔗糖、0.2mg/L的NAA、0.4g/L的碳粉、250mg/L的头孢霉素、50mg/L的卡那霉素和6g/L的琼脂配制而成,pH为5.8‑6.2。2CN114836468A说明书1/6页一种高效的白桦根转基因方法技术领域[0001]本发明属于植物转基因技术领域,尤其涉及一种高效的白桦根转基因方法