一种倍半萜类化合物及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114853574A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202110146272.2A01P3/00(2006.01)(22)申请日2021.02.03A01P1/00(2006.01)C12P15/00(2006.01)(83)生物保藏信息C12N1/20(2006.01)CGMCCNO.206282020.09.10C12R1/465(2006.01)(71)申请人沈阳农业大学地址110866辽宁省沈阳市沈河区东陵路120号(72)发明人于志国毕于慧刘鑫刘飞(74)专利代理机构沈阳科威专利代理有限责任公司21101专利代理师胡野(51)Int.Cl.C07C35/37(2006.01)C07C29/76(2006.01)A01N31/06(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图7页(54)发明名称一种倍半萜类化合物及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种倍半萜类化合物及其制备方法和应用，所述倍半萜类化合物命名为（5R）‑albaflavenolC，所述（5R）‑albaflavenolC的分子式为C15H24O，所述（5R）‑albaflavenolC从达格斯坦链霉菌的发酵液中提取获得，并可以利用微生物进行液体发酵生产，通过发酵条件的优化，避免光、酸、碱及热等因素对分离提纯及保存的影响，增大产量和化合物纯度，其工艺简便，周期短，成本低，来源有保证，所述（5R）‑albaflavenolC可作为一种新型农药先导化合物，制备新型农用抗生素，用于防治由灰梨孢，立枯丝核菌，大斑突脐孢菌引起的病害。CN114853574ACN114853574A权利要求书1/2页1.一种倍半萜类化合物，其特征是：所述倍半萜类化合物命名为(5R)‑albaflavenolC，所述(5R)‑albaflavenolC的分子式为C15H24O，结构式为：2.根据权利要求1所述的一种倍半萜类化合物的制备方法，其特征是：所述倍半萜类化合物(5R)‑albaflavenolC的制备包括以下步骤：(1)菌株培养所述菌株为达格斯坦链霉菌，所述达格斯坦链霉菌保藏单位为中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.20628,保藏日期为2020年9月10日，分类命名为达格斯坦链霉菌Streptomycesdaghestanicus；所述达格斯坦链霉菌菌株接种到在高氏一号培养基上，28℃条件下培养5d，加入无菌水制成孢子悬浮液；所述孢子悬浮液的浓度为1‑6×105个/mL；(2)发酵培养a.一级种子培养：一级种子培养基采用ISP2液体培养基，所述孢子悬浮液与ISP2液体培养基的添加体积比为1:10‑1:100，180r/min，28℃振荡培养2d，获得一级种子培养液；所述ISP2液体培养基配方：麦芽浸膏粉10g，葡萄糖4g，酵母粉4g，蒸馏水1L，pH7.3，121℃，30min灭菌；b.二级种子培养：二级种子培养基采用F液体培养基，所述一级种子培养液和F液体培养基的添加体积比为1:1‑1:20，180r/min，28℃振荡培养2d，获得二级种子培养液；所述F液体培养基配方为：蔗糖100g，葡萄糖10g，酪蛋白氨基酸0.1g，酵母浸粉5g，K2SO40.25g，MgCl2·6H2O10g，微量元素1ml，水1L，pH7.0；所述微量元素配方包括MnSO4·7H2O100mg，CuSO4·7H2050mg，ZnSO4·7H2O100mg，CoCl2100mg，纯净水100ml；c.制备发酵液进行发酵培养：所述发酵液包括二级种子培养液与F液体培养基，所述二级种子培养液与F液体培养基添加体积比为1:1‑1:20；所述发酵液中添加AmberliteXAD16型号的大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂体积为发酵液的2％‑10％；180r/min，28℃振荡培养7d，获得含有大孔吸附树脂的菌体发酵液；(3)(5R)‑albaflavenolC的分离纯化a.洗掉菌体，收集树脂，置于28℃电热恒温干燥箱中烘干，烘干好的树脂用甲醇洗脱，反复洗脱四次，收集洗脱液并进行旋转蒸发，得到甲醇粗提物浸膏Fr.1；b.采用V二氯甲烷:V甲醇:V水＝2:1:1的比例对甲醇浸膏Fr.1进行萃取，得到二氯甲烷浸膏Fr.2；c.对二氯甲烷浸膏Fr.2进行硅胶柱层析，依次用100％CH2Cl2、CH2Cl2:CH3OH＝100：1、2CN114853574A权利要求书2/2页CH2Cl2:CH3OH＝100：2、CH2Cl2:CH3OH＝100：4、CH2Cl2:CH3OH＝100：8、CH2Cl2:CH3OH＝100：16及100％CH3OH溶液进行梯度洗脱，每个梯度50