一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114874338A(43)申请公布日2022.08.09(21)申请号202210556589.8A61K39/135(2006.01)(22)申请日2022.05.18A61P31/14(2006.01)C12R1/19(2006.01)(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号华中农业大学农业微生物国家重点实验室B座(72)发明人李祥敏钱平曹楠(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师薛红凡(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)C07K1/22(2006.01)A61K39/385(2006.01)权利要求书2页说明书10页序列表10页附图4页(54)发明名称一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。本发明将Lumazine合酶(LS)基因与口蹄疫结构蛋白VP1上GH‑loop环基因及3A或3D基因分别进行串联形成LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP、LOOP‑LS‑3D编码基因，经原核表达系统表达获得纳米颗粒。将所述纳米颗粒作为免疫原与佐剂制成纳米颗粒疫苗免疫动物，LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP可以有效激发体液及细胞免疫。本发明可利用LS体外自组装特性形成纳米颗粒，与当前市面上灭活疫苗相比具有生产成本低，产量高、制备简单、安全性更高等优点。CN114874338ACN114874338A权利要求书1/2页1.一种口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，所述口蹄疫病毒纳米颗粒是由FMDVVP1的GH‑loop环肽、FMDV结构蛋白3A的T细胞表位、FMDV的3D的T细胞表位和Lumazine合酶中的两种或多种融合表达得到；所述Lumazine合酶的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；所述GH‑loop环肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；所述FMDV的结构蛋白3A的T细胞表位的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；所述FMDV的3D的T细胞表位的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。2.根据权利要求1所述口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，包括FMDVVP1的GH‑loop环肽、Lumazine合酶和以下0～1种多肽：FMDV结构蛋白3A的T细胞表位和FMDV3D的T细胞表位。3.根据权利要求2所述口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，包括LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP和LOOP‑LS‑3D；所述LS‑LOOP的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示；所述3A‑LS‑LOOP氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述3D‑LS‑LOOP的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；所述LOOP‑LS‑3D的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。4.权利要求1～3任意一项所述口蹄疫病毒纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：人工合成带6His标签的LS‑LOOP融合基因序列，或以所述LS‑LOOP为模板设计引物分别扩增出均带有6His标签的3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP、LOOP‑LS‑3D融合基因片段；将带6His标签的LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP或LOOP‑LS‑3D融合基因片段克隆至载体中，得到重组载体；将所述重组载体转化入原核表达系统中表达，得到工程菌株；将所述工程菌株进行培养，融合蛋白经表达和纯化，得到口蹄疫病毒纳米颗粒。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的3A‑LS‑LOOP融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQIDNO:16所示的3A‑LS‑LOOP‑F1、核苷酸序列如SEQIDNO:17所示的3A‑LS‑LOOP‑F2、核苷酸序列如SEQIDNO:18所示的3A‑LS‑LOOP‑F3和核苷酸序列如SEQIDNO:19所示的3A‑LS‑LOOP‑R。6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的3D‑LS‑LOOP融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQIDNO:20所示的3D‑LS‑LOOP‑F1、核苷酸序列如SEQIDNO:21所示的3D‑LS‑LOOP‑F2和核苷酸序列如SEQIDNO:22所示的3D‑LS‑LOOP‑R。7.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的LOOP‑LS‑3D融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQIDNO:23所示的loop‑F、核苷酸序列如SEQIDNO:24所示的LOOP‑R、核苷酸序列如SEQIDNO:25所示的LS‑