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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115028744A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210771918.0G01N33/569(2006.01)(22)申请日2022.06.30C12R1/19(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所地址730070甘肃省兰州市盐场堡徐家坪1号(72)发明人郭慧琛孙世琪白满元裴辰辰董虎张韵吴金恩尹双辉丁耀忠何继军靳野刘在新(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师苏士莹(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/70(2006.01)A61K39/135(2006.01)A61P31/14(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表3页附图3页(54)发明名称一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用,涉及生物医药技术领域。本发明所述VP1嵌合纳米颗粒,为将O型/A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1和天然蛋白质纳米骨架蛋白共价连接得到。本发明在制备所述VP1嵌合纳米颗粒时,通过蛋白骨架共价连接口蹄疫VP1结构蛋白,将其展示在纳米笼外部,并且采用小泛素样修饰蛋白原核表达系统,既促进了目的蛋白的正确折叠,提高可溶性表达,又兼顾了原核表达系统表达效率高,成本低等优点。本发明的O型/A型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒可在制备用于预防O型/A型口蹄疫病毒引起疾病的疫苗中应用,也可在制备用于检测O型/A型口蹄疫病毒的检测试剂中应用。CN115028744ACN115028744A权利要求书1/1页1.一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒,其特征在于,所述VP1嵌合纳米颗粒包括共价连接的O型/A型口蹄疫病毒的VP1蛋白和天然蛋白质骨架蛋白。2.根据权利要求1所述VP1嵌合纳米颗粒,其特征在于,在所述共价连接前还包括分别对O型/A型口蹄疫病毒的VP1蛋白和天然蛋白质骨架蛋白进行密码子优化,优化后再进行所述共价连接。3.根据权利要求2所述VP1嵌合纳米颗粒,其特征在于,经所述共价连接后,得到的O型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒的编码基因序列如SEQIDNO.1所示;得到的A型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒的编码基因序列如SEQIDNO.2所示。4.权利要求1~3任一项所述VP1嵌合纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤:(1)分别对O型/A型口蹄疫病毒的VP1蛋白和天然蛋白质骨架蛋白进行密码子优化,分别对优化后的O型口蹄疫病毒的VP1蛋白和天然蛋白质骨架蛋白、优化后的A型口蹄疫病毒的VP1蛋白和天然蛋白质骨架蛋白进行共价连接,然后分别插入到载体pSMA中,得重组O型pSMA‑VP1质粒和重组A型pSMA‑VP1质粒;(2)将步骤(1)所述重组O型pSMA‑VP1质粒和重组A型pSMA‑VP1质粒共转至大肠杆菌感受态中,得重组菌;(3)对步骤(2)所述重组菌进行原核表达,纯化后体外组装,得O型/A型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒。5.根据权利要求4所述制备方法,其特征在于,步骤(1)中分别将SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列插入到载体pSMA的BsmBI和BamHI酶切位点之间。6.根据权利要求4所述制备方法,其特征在于,步骤(2)所述共转时,将每100μL的大肠杆菌感受态与100ng的重组O型pSMA‑VP1质粒和100ng的重组A型pSMA‑VP1质粒混合。7.根据权利要求4所述制备方法,其特征在于,步骤(3)所述纯化包括在所述原核表达后,对收集得到的菌体沉淀进行裂解,将裂解产生的上清液进行镍柱亲和层析纯化。8.根据权利要求4所述制备方法,其特征在于,步骤(3)所述体外组装包括将纯化后的重组蛋白置于透析袋中,在500mL组装缓冲液中进行组装,所述500mL组装缓冲液包括500mMNaCl和50mMTris‑HCl,pH8.0。9.权利要求1~3任一项所述VP1嵌合纳米颗粒在制备预防O型/A型口蹄疫病毒引起疾病的疫苗中的应用。10.权利要求1~3任一项所述VP1嵌合纳米颗粒在制备检测O型/A型口蹄疫病毒的检测试剂中的应用。2CN115028744A说明书1/8页一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用。背景技术[0002]口蹄疫(Footandmouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物。由于其传染性强,在几乎全球各地都有发生,严重影响了畜牧业的健康持续发展,也使得易感动物及其相关产品的供给和贸易受到限制,从而产生重大的经济影响