一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114891098A(43)申请公布日2022.08.12(21)申请号202210321963.6(22)申请日2022.03.28(71)申请人深圳康体生命科技有限公司地址518123广东省深圳市龙岗区南湾街道南新路13号C栋申请人山西农业大学(72)发明人贾琼杜孩范瑞文胡世雄(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师吴波(51)Int.Cl.C07K16/12(2006.01)C12N15/13(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书19页序列表2页附图4页(54)发明名称一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体及其应用(57)摘要本发明提供了一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明提供的产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体能够特异性结合产气荚膜梭菌β毒素蛋白，对该蛋白的灵敏度为最低为0.3125μg/ml；能以ELISA的方法检测羊和羊驼粪便中的产气荚膜梭菌β毒素，灵敏度为1μg/ml。CN114891098ACN114891098A权利要求书1/1页1.一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体，其特征在于，所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.一种编码权利要求1所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种含有权利要求2所述核苷酸序列的表达载体。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述细胞表达权利要求1所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体或含有权利要求3所述表达载体。5.权利要求1所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体或权利要求2所述核苷酸序列在制备检测产气荚膜梭菌β毒素产品中的应用。6.权利要求1所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体或权利要求2所述核苷酸序列在制备检测与产气荚膜梭菌β毒素有关疾病产品中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述疾病包括坏死性小肠结肠炎和肠毒素血症。8.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂、试剂盒、试纸和探针。9.一种非诊断目的的检测粪便中产气荚膜梭菌β毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：以畜禽粪便作为抗原包被酶标板，以权利要求1所述纳米抗体为一抗进行ELISA检测。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述ELISA方法中的二抗为His‑HRP抗体。2CN114891098A说明书1/19页一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体及其应用。背景技术[0002]骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，单域抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。与传统的四联体抗体相比，单域抗体的主要特点有：分子量小，结构简单，理化性质稳定等。纳米抗体得优良特性使其在多种方面具有优势：在抗体进入机体方面纳米抗体能够穿过动物机体内的一些保护性的屏障进入发病部位发挥作用，如血脑屏障、血睾屏障等；在抗原抗体结合方面能够结合一些隐蔽的抗原表位，特别适用于比较难得到抗体的靶点，如GPCR、离子通道和酶活中心等；在降低生产成本方面纳米抗体结构简单易于体外表达，同时体外表达不易产生包涵体，生产工艺简单；同时纳米抗体的分子量小，结构简单，更有利于进行基因改造，纳米抗体人源化修饰等特性。[0003]产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，又称魏氏梭菌(Clostridiumwelchii)，也称产气荚膜芽孢杆菌。目前，已发现产气荚膜梭菌产生的毒素和酶多达20种，其中α毒素(CPA)，β毒素(CPB)，ε毒素(ETX)，ι毒素(ITX)是其产生的最主要的毒素，也是诱导疾病发生的主要毒素。β毒素可以由B型和C型产气荚膜梭菌产生，是人类和动物坏死性小肠结肠炎和肠毒素血症的主要毒素。制备产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体，一方面可以成为快速检测产气荚膜梭菌β毒素的工具，另一方面可以作为治疗产气荚膜梭菌β毒素引起的疾病提供方法，目前尚未有产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体的有关研究。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种对产气荚膜梭菌β毒素蛋白具有较好的灵敏度的产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体，可用于产气荚膜梭菌β毒素的检测。[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：[0006]本发明提供了一种产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体，所述产气荚膜梭菌β毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。