一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115850466A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211021233.0(22)申请日2022.08.24(71)申请人山西农业大学地址030031山西省太原市小店区龙城大街81号(72)发明人范瑞文贾琼胡世雄秦蓉芬李佳敏迟志端(74)专利代理机构北京圣州专利代理事务所(普通合伙)11818专利代理师李春(51)Int.Cl.C07K16/12(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/70(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书18页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用(57)摘要本发明提供了一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用，属于生物工程技术领域，所述产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明提供的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体能够特异性结合产气荚膜梭菌α毒素蛋白，对该蛋白的灵敏度为最低为0.625μg/ml；能以ELISA的方法检测鸡和羊驼粪便中的产气荚膜梭菌α毒素，灵敏度为2μg/ml。CN115850466ACN115850466A权利要求书1/1页1.一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体，其特征在于，所述产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.权利要求1所述的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体在制备特异性结合产气荚膜梭菌α毒素蛋白试剂中的应用。3.权利要求1所述的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体在制备检测动物粪便中产气荚膜梭菌α毒素试剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述动物包括鸡和/或羊驼。2CN115850466A说明书1/18页一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用。背景技术[0002]骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，单域抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。与传统的四联体抗体相比，单域抗体的主要特点有：分子量小，结构简单，理化性质稳定等。纳米抗体的优良特性使其在多种方面具有优势：在抗体进入机体方面纳米抗体能够穿过动物机体内的一些保护性的屏障进入发病部位发挥作用，如血脑屏障、血睾屏障等；在抗原抗体结合方面能够结合一些隐蔽的抗原表位，特别适用于比较难得到抗体的靶点，如GPCR、离子通道和酶活中心等；在降低生产成本方面纳米抗体结构简单易于体外表达，同时体外表达不易产生包涵体，生产工艺简单；同时纳米抗体的分子量小，结构简单，更有利于进行基因改造，纳米抗体人源化修饰等特性。[0003]产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，又称魏氏梭菌(Clostridiumwelchii)，也称产气荚膜芽孢杆菌。目前，已发现产气荚膜梭菌产生的毒素和酶多达20种，其中α毒素(CPA)、β毒素(CPB)、ε毒素(ETX)、ι毒素(ITX)是其产生的最主要的毒素，也是诱导疾病发生的主要毒素。α毒素是产气荚膜梭菌毒素中发现最早研究最多的毒素，它本质上是一种含锌的磷脂酶C，经修饰后具备毒素活性，该毒素包含370个氨基酸，分子量大小约为43kDa，具有致死，溶血和皮肤坏死活性以及磷脂酶C和鞘磷脂酶活性，并且是气体坏疽发展的主要致病因素。制备产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体，一方面可以成为快速检测产气荚膜梭菌α毒素的工具，另一方面可以作为治疗产气荚膜梭菌α毒素引起的疾病提供方法。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体及其应用，本发明提供的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体能够特异性结合产气荚膜梭菌α毒素蛋白，能够检测动物粪便中的产气荚膜梭菌α毒素。[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：[0006]本发明提供了一种产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体，所述产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。[0007]本发明还提供了上述技术方案所述的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体在制备特异性结合产气荚膜梭菌α毒素蛋白试剂中的应用。[0008]本发明还提供了上述技术方案所述的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体在制备检测动物粪便中产气荚膜梭菌α毒素试剂中的应用。[0009]优选的，所述动物包括鸡和/或羊驼。[0010]本发明的有益效果为：3CN115850466A说明书2/18页[0011]本发明提供的产气荚膜梭菌α毒素纳米抗体能够特异性结合产气荚膜梭菌α毒素蛋白，对该蛋白的灵敏度为最低为0.625μg/ml；能以ELISA的方法检测鸡和羊