用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114921461A(43)申请公布日2022.08.19(21)申请号202210635291.6C12Q1/6858(2018.01)(22)申请日2022.06.06(71)申请人四川农业大学地址611130四川省成都市温江区惠民路211号申请人四川省林业科学研究院(72)发明人杨汉波辜云杰朱艳彭建谢佳鑫安文娜朱鹏陈良华何方(74)专利代理机构四川省方圆智云知识产权代理事务所(普通合伙)51368专利代理师王悦(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/6895(2018.01)权利要求书1页说明书10页序列表2页附图2页(54)发明名称用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合及应用(57)摘要本发明公开了用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合，所述SSR分子标记引物有5对，分别为PZmk03、PZmf07、PZmf05、PZmf06和PZmf10。本发明开发5对SSR特异性标记引物克服形态学标记准确性低的缺点，弥补现有的AFLP、RAPD、ISSR等分子标记技术缺乏特异性的缺点，可实现对桢楠种质的高效、科学、准确的鉴定。CN114921461ACN114921461A权利要求书1/1页1.用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合，其特征在于，所述SSR分子标记引物有5对，分别为PZmk03、PZmf07、PZmf05、PZmf06和PZmf10，其中：PZmk03的前向引物序列如SEQIDNo.1所示，后向引物序列如SEQIDNo.2所示；PZmf07的前向引物序列如SEQIDNo.3所示，后向引物序列如SEQIDNo.4所示；PZmf05的前向引物序列如SEQIDNo.5所示，后向引物序列如SEQIDNo.6所示；PZmf06的前向引物序列如SEQIDNo.7所示，后向引物序列如SEQIDNo.8所示；PZmf10的前向引物序列如SEQIDNo.9所示，后向引物序列如SEQIDNo.10所示。2.一种用于桢楠种质鉴定的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的SSR分子标记引物组合。3.权利要求1所述的SSR分子标记引物组合或权利要求2所述的试剂盒在桢楠种质鉴定或指纹图谱构建中的应用。4.一种桢楠SSR指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取桢楠植株的总DNA；(2)以步骤(1)的总DNA为模板，以权利要求1所述的5对SSR分子标记引物进行PCR扩增；(3)毛细管电泳检测步骤(2)的扩增产物，收集数据；(4)对步骤(3)的数据进行处理，构建出桢楠的SSR指纹图谱。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，PCR扩增中：PCR反应体系共25uL:上下游引物各1uL，DNA模板1uL，PCRmix12.5uL，9.5uL的无酶无菌水；PCR反应程序:94℃预变性4min；94℃变性30s，56‑60℃复性30s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸5min。2CN114921461A说明书1/10页用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合及应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于桢楠种质鉴定的SSR分子标记引物组合及应用。背景技术[0002]遗传标记是基因型的特殊的易于识别的表现形式。理想的遗传标记应具备以下4个条件：(1)具有较强的多态性；(2)表现为共显性，因而能够鉴别出纯和基因型或杂合基因型；(3)对主要的农艺性状没有影响；(4)经济方便，容易观察记载。形态标记即植物的外部特征特性，如树高、胸径、叶色、叶形等。此种形态标记简单直观，长期以来作为种质资源鉴定及育种材料选择的基本方法。但是形态标记数少、多态性差、易受环境条件的影响，容易造成种质资源鉴定错误。相较于形态标记，分子标记具有以下优势：(1)直接以DNA的形式呈现，在植物的各组织、各发育时期均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否的问题；(2)数量极多，遍及整个基因组；(3)多态性高，存在许多等位变异；(4)表现为“中性”，不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的连锁；(5)许多标记表现为共显性，能够鉴别出纯和基因型和杂合基因型，提供完整的遗传信息。在林木基因组中存在着许多由1‑4个碱基对组成的简单重复序列，如(GA)n、(AC)n、(GAA)n(其中n为重复次数)等，这些重复序列分布遍及所有的染色体及染色体的各个区段，称为简单重复序列(SSR)，又称为微卫星。SSR可直接反映遗传信息，并具有操作简单、稳定性好以及通用性好等优点，被广泛应用于品种鉴定、分子育种等方面。[0003]王英等.3种楠木DNA提取及其ISSR标记鉴别.四川农业大学学报,2016,34(4):450‑477.这篇文献从20条ISSR