一种复合发酵菌剂及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114990007A(43)申请公布日2022.09.02(21)申请号202210488432.6C05F17/20(2020.01)(22)申请日2022.05.06C12R1/01(2006.01)C12R1/04(2006.01)(71)申请人广州大丘有机农产有限公司C12R1/07(2006.01)地址510900广东省广州市从化区城郊街C12R1/125(2006.01)光辉村大丘庄园自编之001C12R1/39(2006.01)(72)发明人裴生帅谭柏深C12R1/645(2006.01)(74)专利代理机构北京高航知识产权代理有限C12R1/85(2006.01)公司11530专利代理师乔浩刚(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N1/16(2006.01)C12N11/04(2006.01)C12N11/082(2020.01)C12N11/14(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种复合发酵菌剂及其制备方法(57)摘要本发明提供一种复合发酵菌剂及其制备方法，属于发酵技术领域，具体是先将枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌分别进行发酵培养，发酵完成后每种菌株的发酵液中有效活菌数均应大于2.0×109cfu/mL；再按比混合并进行复合培养；最后加入负载载体进行菌体负载后冻干，制得所述复合发酵菌剂。本发明生产工艺简单，各菌种齐全、配比合理，将其用作腐熟剂腐熟，具有降解速度快，使用效果好的特点。CN114990007ACN114990007A权利要求书1/2页1.一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)单菌种培养将枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌分别进行发酵培养，发酵完成后每种菌株的发酵液中有效活菌数均应大于2.0×109cfu/mL；(2)复合培养将分别发酵培养得到的枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌按比混合并进行复合培养；(3)负载在复合培养得到的复合菌液中加入负载载体进行菌体负载，冻干后制得所述复合发酵菌剂。2.根据权利要求1所述的一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，复合培养步骤中，按有效活菌数计，所述枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌的混合比例为(3‑4)：(5‑7)：(5‑10)：(2‑3)：(4‑6)：10。3.根据权利要求1所述的一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述负载载体的制备方法包括以下步骤：S1、前处理将废弃灭活的酵母菌以饱和盐水漂洗，漂洗完成后加入热的碱性溶液并保温搅拌1‑30min，分离所述酵母菌，以清水漂洗至中性，将漂洗后的酵母菌按1‑3g/100mL的料液比再次分散在去离子水中，加入酸溶液调节pH至1‑2，得到悬液，在搅拌条件下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后在30‑40℃下保温搅拌反应0.5‑1h，分离所述酵母菌并依次以无水乙醇和去离子水洗涤，得到前处理的酵母菌；其中，所述悬液与所述正硅酸乙酯的混合体积比为(30‑40)：1；S2、中层制备将所述前处理的酵母菌依次分散在碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液中，分别搅拌反应1‑2h，分离所述酵母菌并干燥，得到二次改性的酵母菌；其中，所述酵母菌的分散料液比为1‑2g/100mL，所述碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液的浓度分别为0.5‑1mol/L、2‑3mol/L、2‑3mol/L；S3、外层制备称取PEO‑PPO‑PEO三嵌段共聚物并溶解在无水乙醇中，分别加入氨水和正硅酸乙酯，充分混合后加入所述二次改性的酵母菌并分散，得到分散液，将所述分散液在50‑60℃下保温搅拌反应1‑2h，分离不溶物并分别以无水乙醇和水洗涤，干燥制得前体材料；其中，所述PEO‑PPO‑PEO三嵌段共聚物的溶解浓度在30‑40mg/mL，所述无水乙醇与所述氨水、所述正硅酸乙酯的混和体积比为100：(6‑7)：(18‑20)；所述氨水的质量浓度在1‑3％；S4、热处理在惰性气体保护下，将所述前体材料进行低温碳化，低温碳化完成后依次以酸溶液和去离子水洗涤，所述低温碳化的温度为300‑400℃，碳化升温速率为5‑10℃/min，低温碳化时间为2‑5h；S5、二次热处理在惰性气体保护下，将低温碳化的干燥产物进行高温碳化，所述高温碳化的温度为2CN114990007A权利要求书2/2页600‑1200℃，碳化升温速率为5‑10℃/min，高温碳化时间为2‑4h。4.根据权利要求1所述的一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，按重量份数计，所述枯草芽孢杆菌的培养基组成为：黄豆粉8‑16份、玉米粉4‑8份、葡萄糖5‑12份、鱼粉2‑8份、