一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115088622A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210866641.X(22)申请日2022.07.22(71)申请人云南省农业科学院高山经济植物研究所地址674199云南省丽江市古城区义正街古路坞下段33号(72)发明人郭承刚和寿星徐春莲汤王外黄杏娥郭应杰杨文宏曹杨王玲(74)专利代理机构北京元本知识产权代理事务所(普通合伙)11308专利代理师曹广生(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法(57)摘要本发明公开了一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，涉及云南独蒜兰组织培养技术领域。本发明包括将成熟蒴果种子播于培养基上进行培养，诱导种子萌发阶段避光培养，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养；原球茎继续增殖形成苗和原球茎混杂的块状物；对继代增殖原球茎进行叶芽诱导和丛芽增殖；选取经叶芽诱导、丛芽增殖的小苗用于生根壮苗培养；且再次培养；最后进行炼苗培养。本发明通过提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法的应用，使得云南独蒜兰组培苗炼苗成苗率提高35％，成苗率提高20％，有效解决了独蒜兰炼苗成活率和成苗率低的问题，提高了云南独蒜兰种苗经济效益，为云南独蒜兰今后大规模种植提供优质种苗打下基础。CN115088622ACN115088622A权利要求书1/2页1.一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、将云南独蒜兰植株开花后5‑7天内进行自交授粉获得蒴果，以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果作为外植体；步骤二、对作为外植体的蒴果进行消毒杀菌，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分进行备用；步骤三、剖开无菌蒴果取出种子，将种子播于萌发培养基上并分散均匀，完成接种后将其置于培养室中培养，诱导种子萌发阶段避光培养，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养；步骤四、在播种40d‑50d后原球茎开始分化出叶，同时原球茎继续增殖，形成苗和原球茎混杂的块状物，原球茎经增殖培养30d后原球茎都能长出第1片叶芽，本阶段采用光照培养；步骤五、选择大小适合的原球茎接种到不同激素种类和浓度的培养基上，对继代增殖原球茎进行叶芽诱导和丛芽增殖，本阶段采用光照培养；步骤六、选取经叶芽诱导、丛芽增殖的小苗用于生根壮苗培养，本阶段采用光照培养；步骤七、把生根培养好的培养瓶苗放置在可以控制光照、温度的培养室中进行再次培养，再次培养分为三个阶段，第一阶段将温度控制在35℃，无光照的环境中培养25‑30天，让高温抑制云南独蒜兰组培苗的生长，使叶子的光合作用降低，让原有的叶子黄化，把营养全部供给给假鳞茎，让假鳞茎膨大，等到叶子全部枯萎；第二阶段将培养温度降低至20℃继续培养25‑30天，直至独蒜兰假鳞茎旁边有新的假鳞茎长出并出现新的芽点，第三阶段将培养温度提高至25℃继续培养25‑30天，使第一阶段叶片黄化的假鳞茎再次长出新叶片，假鳞茎旁边长出的芽点也继续长大和长出叶片；步骤八、把再次培养好的云南独蒜兰组培苗经过除培养基、消毒和分拣处理，置于炼苗棚中进行炼苗培养。2.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤一具体为：把4‑5月开花的云南独蒜兰在5‑7天内进行自交授粉，授粉成功的继续培养4‑5个月获得蒴果，以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果为外植体。3.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤二具体为：用适量清水加洗洁剂洗涤蒴果6min，然后用无菌水冲净蒴果表面的洗洁精，在超净工作台上将洗涤后的蒴果用75％的酒精进行表面消毒处理30s，再用0.1％的氯化汞消毒15min，然后用无菌水冲洗5‑6次，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分后备用。4.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤三具体为：超净工作台上用消毒后的手术刀将消毒处理过的蒴果两端切除，纵向剖开蒴果，将种子播于萌发培养基上，轻轻晃动培养瓶使种子均匀散布，完成接种后将其置于培养室培养，诱导种子萌发阶段避光培养，温度为25℃，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养，温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度1500lx。5.根据权利要求1或4所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，用于种子萌发培养的所述培养基由以下几种组分构成：40g/LMS，0.25mg/L6‑BA，1.0mg/LNAA，1.0g/L蛋白胨，1.0g/L炭粉，该培养基的pH为5.8‑6.0。2CN115088622A权利要求书2/2页6.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗