一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115105589A(43)申请公布日2022.09.27(21)申请号202210750561.8A61P31/20(2006.01)(22)申请日2022.06.29C12N7/00(2006.01)(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号申请人广东永顺生物制药股份有限公司(72)发明人魏京广廖嘉明张东卓秦启伟康绍珠黄友华黄晓红穆光慧林德锐杨傲冰(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师赵崇杨(51)Int.Cl.A61K39/12(2006.01)A61K39/39(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗及其制备方法。本发明利用斑石鲷虹彩病毒SD株病毒液制备得到了安全性高、免疫保护效果好的斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗，利用该灭活疫苗，可以有效降低斑石鲷虹彩病毒感染后的养殖斑石鲷的死亡率，填补了目前尚未有斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗的空白，有助于斑石鲷虹彩病毒病的防控。CN115105589ACN115105589A权利要求书1/1页1.一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗，其特征在于，包括灭活的斑石鲷虹彩病毒SD株病毒液以及佐剂。2.根据权利要求1所述斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗，其特征在于，所述佐剂为白油佐剂、氢氧化铝胶佐剂或ISA201VG佐剂。3.权利要求1所述斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备斑石鲷虹彩病毒SD株病毒液；S2.灭活步骤S1所得病毒液并进行灭活检验；S3.将灭活检验合格的灭活病毒液与佐剂混合制备得到灭活疫苗。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，具体步骤如下：S1.将斑石鲷虹彩病毒SD株接种于斑石鲷脑细胞，当细胞病变率高于90％时，‑20℃条件下反复冻融，收获病毒液，4℃保存备用；S2.甲醛灭活步骤S1所得病毒液并进行灭活检验；S3.将灭活检验合格的灭活病毒液与吐温‑80混合制备成水相，将白油与司本‑80混合煮沸后制备成油相，将水相与油相混合，10000～12000rpm乳化5～10分钟，制成油包水型灭活疫苗；或将灭活检验合格的灭活病毒液与氢氧化铝胶混合，200～1000rpm搅拌5～10分钟，制成氢氧化铝胶灭活疫苗；或将灭活检验合格的灭活病毒液与ISA201VG混合，200～500rpm搅拌5～10分钟，制成水包油包水灭活疫苗。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S2所述甲醛灭活方法为：在步骤S1制备所得斑石鲷虹彩病毒SD株病毒液中加入甲醛溶液摇匀，4℃灭活96小时以上；所述病毒液与甲醛溶液的体积比为1000:1。6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S3中所述灭活病毒液中的病毒含量为6.07.010～10TCID50/mL。7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S3中所述的灭活病毒液与吐温‑80的体积比为96:4，白油与司本‑80的体积质量比为96:4，水相与油相的体积比为1:2。8.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S3中所述的灭活病毒液与氢氧化铝胶的体积质量比为4:1。9.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S3中所述的灭活病毒液与ISA201VG的质量比为1:1。10.权利要求1或2所述灭活疫苗在防治由斑石鲷虹彩病毒引发的斑石鲷虹彩病毒病或制备防治斑石鲷虹彩病毒病的产品中的应用。2CN115105589A说明书1/7页一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明属于灭活疫苗技术领域。更具体地，涉及一种斑石鲷虹彩病毒灭活疫苗及其制备方法。背景技术[0002]斑石鲷(Oplegnathuspunctatus)俗称斑鲷、花金鼓或黑金鼓，英文名称Spottedparrotfish，是我国名贵海水养殖鱼类新品种之一，养殖经济效益很高。随着养殖规模的不断扩大，斑石鲷病害的发生也越来越频繁和严重，给斑石鲷养殖行业的发展带来严重影响，也造成了巨大的经济损失。[0003]虹彩病毒属大型二十面体状、细胞质型DNA病毒，主要感染无脊椎动物和低等脊椎动物。虹彩病毒科(Iridoviridae)共分为5个病毒属，即虹彩病毒属(Iridovirus)、绿虹彩病毒属(Chloriridovirus)、蛙病毒属(Ranavirus)、淋巴囊肿病毒属(Lymphocystivirus)和肿大细胞病毒属(Megalocytivirus)。其中，肿大细胞病毒属病毒引起的细胞肿大虹彩病毒病是造成鱼类死亡的最主要病毒病之一，可感染多种海水或淡水养殖鱼类。斑石鲷虹彩病毒(SpottedKnifejawIridovirus，SKIV)隶属于肿