一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb-3共分离的InDel标记及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115125320A(43)申请公布日2022.09.30(21)申请号202210616241.3C12N15/11(2006.01)(22)申请日2022.06.01(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号申请人新疆农业科学院哈密瓜研究中心(72)发明人孔秋生张永兵魏小英范蓉杨永魏明华李寐华王珍珠凌悦铭黄颖(74)专利代理机构武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231专利代理师徐绍新(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)权利要求书1页说明书4页序列表1页附图1页(54)发明名称一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb-3共分离的InDel标记及其应用(57)摘要本发明公开了与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb‑3共分离的InDel分子标记及其应用。通过构建重组自交系分离群体，利用BSA方法结合全基因组重测序对甜瓜蔓枯病抗性进行基因定位，在两亲本之间具有多态性的位点设计开发InDel分子标记，并在分离群体各株系中对分子标记进行筛选验证，最终挖掘到了一个与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb‑3共分离的分子标记。该分子标记所包含的核苷酸序列分别由SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的引物经PCR扩增得到，扩增得到的片段分别与抗病和感病基因共分离。本发明提供的分子标记可以有效、快速的区分甜瓜蔓枯病抗、感单株，提高了甜瓜蔓枯病表型鉴定的准确性，可作为一种有效的手段应用于甜瓜蔓枯病抗病育种实践中。CN115125320ACN115125320A权利要求书1/1页1.一种用于甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定的InDel分子标记引物，其特征在：所述InDel分子标记引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。2.权利要求1所述的InDel分子标记引物在甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定中的应用。3.一种甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)提取待测样品的基因组DNA；(2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的InDel分子标记引物进行PCR扩增；(3)对步骤(2)得到的扩增产物进行电泳检测，根据条带大小鉴定甜瓜蔓枯病抗性。4.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：反应体系为10μL，包括模板DNA20ng，浓度为10μM的前引物和后引物各0.5μL，Mix4μL，ddH2O补足。5.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法，其特征在于，所述PCR反应程序为：94℃预变性3min；然后94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共34个循环，最后72℃延伸10min，放入4℃保存。6.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法，其特征在于：步骤(3)中，若只出现与抗病亲本大小相同的特异性条带，即只扩增出大小为248bp的片段，则该甜瓜单株表型为抗病；若只出现与感病亲本大小相同的特异性条带，即只扩增出大小为237bp的片段，则该甜瓜单株表型为感病。2CN115125320A说明书1/4页一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb‑3共分离的InDel标记及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子标记辅助育种技术领域，具体涉及一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb‑3共分离的InDel分子标记及其应用。背景技术[0002]甜瓜(CucumismeloL.)是主要的园艺作物之一，果肉香甜多汁，受到各国消费者的喜爱，被广泛种植，具有十分重要的经济价值。随着农业现代化的发展，农产品种植的商品化、规模化、集约化将成为未来农业的主要发展趋势，随之而来的是扩散速度快且大规模爆发的病虫害，一旦发病严重且防治不及时，往往会造成农产品大幅减产，经济损失严重。目前甜瓜生产上常见的病害有40多种，其中甜瓜蔓枯病(Gummystemblight，GSB)是常见的真菌病害之一，它由亚隔孢壳属的瓜类黑腐小球壳菌(Didymellabryoniae)引起，主要危害叶片和茎部皮层组织，叶片发病一般在叶脉之间发生褐变，或者形成圆形棕褐色斑点；茎部发病初期在近节部产生油浸状病斑，随着时间的推移茎部发生纵裂并产生琥珀色胶状物，后期茎部干枯、表面呈灰白色，当湿度过高时病变的茎部极易发生腐烂导致茎部缢缩，最终植株因失水整株死亡。蔓枯病病原菌产生的子囊孢子和分生孢子等子实体可以通过空气传播到其他宿主植物表面，温暖潮湿的温室环境为该病害的传播提供了有利的条件，在温室中该病害发病严重时可导致甜瓜减产高达50％。在过去的几年里，我国在温室和塑料大棚中种植甜瓜的规模大幅增加，这导致蔓枯病已经成为一种与甜瓜经济效益息息相关的真菌病害。目前生产上甜瓜蔓枯病的主要防治方法是化学防治，但从长