一种用于猪精液超低温保存的稀释液及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115211422A(43)申请公布日2022.10.21(21)申请号202211018151.0(22)申请日2022.08.24(71)申请人江苏农林职业技术学院地址212400江苏省镇江市句容市文昌东路19号申请人苏州市吴中区畜牧兽医站（苏州市吴中区动物疫病预防控制中心）(72)发明人丁晓兰吴井生杨剑波邢军(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师柏尚春(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种用于猪精液超低温保存的稀释液及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种用于猪精液超低温保存的稀释液及其制备方法，该稀释液分为常温稀释液、冷藏稀释液和冷冻稀释液；常温稀释液包括即葡萄糖、EDTA、柠檬酸钠、碳酸氢钠、青霉素、链霉素及超纯水；冷藏稀释液包括葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、青霉素、链霉素及超纯水；冷冻稀释液是在冷藏稀释液中添加OEP、DMF、甘油。稀释液用于猪精液冷冻后，精子活力下降0.2左右，精子活力超过0.6，顶体完整率下降0.1左右；长期冷冻保存后，精子活力和顶体完整率趋于稳定，能满足商业冷冻精液的要求。经其冷冻的精液用于母猪人工授精，母猪的受胎率达到88.46％，平均产活仔数达到11.96头，与常温精液的配种效能相接近。CN115211422ACN115211422A权利要求书1/2页1.一种用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述稀释液分为常温稀释液、冷藏稀释液和冷冻稀释液；所述常温稀释液包括即葡萄糖、EDTA、柠檬酸钠、碳酸氢钠、青霉素、链霉素及超纯水；所述冷藏稀释液包括葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄，青霉素、链霉素及超纯水；所述冷冻稀释液包括葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、OEP、DMF、甘油、青霉素、链霉素及超纯水。2.根据权利要求1所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述常温稀释液中葡萄糖、EDTA、柠檬酸钠、碳酸氢钠、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为23‑28:2.16‑2.64:7.2‑8.8:1.08‑1.32:0.54‑.63:0.9‑1.1:864.72‑1056.88。3.根据权利要求2所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述常温稀释液中葡萄糖、EDTA、柠檬酸钠、碳酸氢钠、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为25‑27:2.28‑2.52:‑7.6‑8.4:1.14‑1.26:0.57‑0.66:0.95‑1.05:912.76‑1008.84。4.根据权利要求1所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述冷藏稀释液中葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为9.9‑12.1:13.32‑16.28:21.78‑26.62:4.5‑5.5:180‑220:5.4‑6.6:9‑11:656‑801。5.根据权利要求4所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述冷藏稀释液中葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为10.45‑11.55:14.06‑15.54:22.99‑25.41:4.75‑5.25:190‑210:5.7‑6.3:9.5‑10.5:692‑765。6.根据权利要求1所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述冷冻稀释液中葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、OEP、DMF、甘油、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为9.3‑12.1:13.32‑16.28:21.78‑26.62:4.5‑5.5:180‑220:4.5‑5.5:36‑44:18‑22:5.4‑6.6:9‑11:597‑730。7.根据权利要求6所述的用于猪精液超低温保存的稀释液，其特征在于，所述冷冻稀释液中葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、卵黄、OEP、DMF、甘油、青霉素、链霉素及超纯水的质量比为10.45‑11.55:14.06‑15.54:22.99‑25.41:4.75‑5.25:190‑210:4.75‑5.25:38‑42:19‑21:5.7‑6.3:9.5‑10.5:630‑697。8.一种权利要求1‑7任一项所述用于猪精液超低温保存的稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)常温稀释液的制备：将葡萄糖、EDTA、柠檬酸钠和碳酸氢钠，溶于超纯水中，充分搅拌，过滤，用超纯水定容，稳定后即为常温稀释液，放入恒温水浴锅备用，使用前添加青霉素和链霉素即可；(2)冷藏稀释液的制备：将卵黄、葡萄糖、柠檬酸、Tris、BSA、青霉素和链霉素溶于超纯水中，充分搅拌，离心分离，上清液稳定后，即为冷藏稀释液，放入冰箱中储存备