一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115232099A(43)申请公布日2022.10.25(21)申请号202210959120.9C07K1/107(2006.01)(22)申请日2022.08.10C07K16/44(2006.01)G01N33/53(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.451962022.06.29(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人周立刚王保民王明安赖道万王伟轩傅小香徐丹李益豪(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245专利代理师李洋(51)Int.Cl.C07D311/92(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)权利要求书2页说明书23页附图6页(54)发明名称一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用。所述半抗原为式II所示的化合物，该半抗原与载体蛋白BSA偶联后得到的稻绿核菌素抗原可作为免疫抗原免疫动物，进而制备得到针对主要稻绿核菌素的单克隆抗体。本发明还公开了小鼠杂交瘤细胞系4A12C6，其在CGMCC的登记入册编号为CGMCCNo.45196，本发明使用的单克隆抗体由该杂交瘤细胞4A12C6CGMCCNo.45196分泌产生。通过实验证明：本发明方法制备的单克隆抗体对主要稻绿核菌素的特异性好、灵敏度高。本发明可用于稻曲球、可能污染的水稻及其制品的大规模检测与质量控制，在主要稻绿核菌素的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。CN115232099ACN115232099A权利要求书1/2页1.式Ⅱ所示的稻绿核菌素半抗原；2.权利要求1所述稻绿核菌素半抗原的制备方法，包括如下步骤：将HemiustilaginoidinF与对氨基苯甲酸重氮盐反应，得到所述稻绿核菌素半抗原；所述HemiustilaginoidinF如式Ⅲ所示；所述对氨基苯甲酸重氮盐如式Ⅳ所示；3.一种稻绿核菌素抗原，是由权利要求1所述的稻绿核菌素半抗原与载体蛋白偶联所得；所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。4.权利要求3所述稻绿核菌素抗原的制备方法，包括如下步骤：在N,N'‑二环己基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的作用下将权利要求1所述稻绿核菌素半抗原与牛血清白蛋白偶联，得到稻绿核菌素半抗原‑牛血清白蛋白；在N,N'‑二环己基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的作用下将权利要求1所述稻绿核菌素半抗原与卵清蛋白偶联，得到稻绿核菌素半抗原‑卵清蛋白。5.小鼠杂交瘤细胞系4A12C6，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.45196。6.权利要求1所述的稻绿核菌素半抗原或权利要求3所述的稻绿核菌素抗原或权利要求5所述的小鼠杂交瘤细胞系4A12C6在如下1)‑3)中任一种中的应用：1)制备抗稻绿核菌素抗体；2CN115232099A权利要求书2/2页2)检测稻绿核菌素；3)制备检测稻绿核菌素的产品。7.一种抗稻绿核菌素抗体，为如下M1)或M2)：M1)所述抗稻绿核菌素抗体是以权利要求3中所述的稻绿核菌素半抗原‑牛血清白蛋白作为免疫抗原制备得到的单克隆抗体；M2)所述抗稻绿核菌素抗体是由权利要求5所述的小鼠杂交瘤细胞系4A12C6分泌产生的单克隆抗体。8.一种用于检测稻绿核菌素的试剂盒，其包括权利要求3中所述的稻绿核菌素半抗原‑卵清蛋白和权利要求7所述的抗稻绿核菌素抗体。9.权利要求8所述的试剂盒在检测稻绿核菌素或制备检测稻绿核菌素的产品中的应用。10.一种稻绿核菌素的检测方法，包括使用权利要求9所述的试剂盒对待测样品进行检测的步骤。3CN115232099A说明书1/23页一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用。背景技术[0002]稻曲病(Ricefalsesmut)是由稻绿核菌(无性态学名为Ustilaginoideavirens(Cooke)Takahashi，有性态学名为Villosiclavavirens(Nakata)TanakaandTanaka)引起的发生在水稻穗部的真菌病害，其田间危害症状为在水稻的穗部形成稻曲球(Ricefalsesmutballs)。近年来，随着高产杂交稻、氮肥大量施用等原因，稻曲病的发生逐年加重并上升为水稻的主要病害。稻曲病不仅影响水稻的产量和品质，同时稻曲病菌可以产生对人和动物有毒的毒素。目前，已经报道稻曲病菌可以产生3类真菌毒素：稻曲菌素(Ustiloxins)、稻绿核菌素(Ustilaginoidins)和山梨素(S