一种植物双元杂交表达载体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115261402A(43)申请公布日2022.11.01(21)申请号202011523803.7(22)申请日2021.04.29(71)申请人未名生物农业集团有限公司地址100085北京市海淀区上地西路39号(72)发明人不公告发明人(51)Int.Cl.C12N15/82(2006.01)A01H1/02(2006.01)C12Q1/6897(2018.01)A01H5/00(2018.01)A01H6/46(2018.01)A01H6/20(2018.01)权利要求书1页说明书12页序列表3页附图7页(54)发明名称一种植物双元杂交表达载体及其应用(57)摘要本发明公开了一种植物双元杂交表达载体及其应用。该植物双元杂交表达载体，由启动子载体和功能基因表达载体组成；所述启动子载体包括目的启动子与转录激活因子编码基因的融合序列；所述功能基因表达载体包括所述目的基因与所述转录激活因子的调控元件的融合序列。本发明还提供了利用该植物双元杂交表达载体进行植物转基因杂交育种的方法。该植物双元杂交表达载体还可用于筛选启动子和鉴定目的基因功能。本发明可用于定向改造和设计植物的性状，可缩短植物杂交育种和改良品种的周期，保证了杂交良种的纯度。CN115261402ACN115261402A权利要求书1/1页1.一种植物双元杂交表达载体，由启动子载体和功能基因表达载体组成；所述启动子载体包括目的启动子与转录激活因子编码基因的融合序列；所述功能基因表达载体包括所述目的基因与所述转录激活因子的调控元件的融合序列。2.根据权利要求1所述的双元杂交表达载体，其特征在于：所述转录激活因子为Gal4，HAP1，E.coli的LexA，HIV的tat，Gal4(DBD)‑VP16或HAP1－VP16。3.根据权利要求1或2所述的双元杂交表达载体，其特征在于：所述目的基因为一个或多个。4.根据权利要求3所述的双元杂交表达载体，其特征在于：所述目的基因为RDG基因。5.一种利用权利要求1‑4任一所述的植物双元杂交表达载体进行植物转基因杂交育种的方法，包括以下步骤：1）将所述功能基因表达载体和所述启动子载体分别转化植物，获得独立的父本和母本转基因植株；2）所述父本和母本转基因植株进行杂交，得到转基因杂交后代。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述父本为被所述启动子载体转化的植株，所述母本为被所述功能基因表达载体转化的植株。7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述功能基因表达载体和所述启动子载体分别选用不同筛选标记基因。8.一种利用权利要求1‑4任一所述的植物双元杂交表达载体鉴定启动子功能的方法，包括以下步骤：1）将待鉴定启动子及报告基因克隆到植物双元杂交表达载体的启动子载体中，得到启动子检测载体；2）利用启动子检测载体转化植物或瞬间表达系统，并通过报告基因的表达来鉴定启动子的功能。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述启动子检测载体中引入LR重组位点得到植物高效启动子检测载体。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述植物高效启动子检测载体为pSGAF或pSGAG。11.一种利用权利要求1‑4任一所述的植物双元杂交表达载体判定基因功能的方法，包括以下步骤：1）将所述功能基因表达载体和所述启动子载体分别转化植物，获得独立的父本和母本转基因植株；所述功能基因表达载体中的功能基因为待检测基因；2）所述父本和母本转基因植株进行杂交，得到转基因杂交后代，观察杂交后代，判定待检测基因的功能。12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述方法还包括在所述功能基因表达载体中引入LR重组位点得到植物高效单基因表达载体或植物高效多基因表达载体。13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述高效单基因表达载体为pSZC、pSZN、pHUG‑1或pKUG‑1；所述植物高效多基因表达载体为pYLVS‑LR、pYLSV‑LR、pYLVUS‑1或pYLSUV‑1。2CN115261402A说明书1/12页一种植物双元杂交表达载体及其应用[0001]技术领域[0002]本发明涉及植物基因工程领域中一种植物双元杂交表达载体及其应用，特别涉及一种植物双元杂交表达载体，利用该植物双元杂交表达载体进行植物转基因杂交育种的方法和该植物双元杂交表达载体在筛选启动子和鉴定目的基因功能中的应用。背景技术[0003]在酵母、昆虫、植物以及哺乳动物等生物中，均存在一类转录激活因子（transcriptionalactivator），能够激活基因的转录。这类激活因子的结构都基本相似，由一个DNA结合区（结构域）（DNA‑bindingdomain，DBD）和一个转录激活区（结构域）（transcriptiona