一种半夏脱毒微球茎的高效生产方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115281093A(43)申请公布日2022.11.04(21)申请号202211109544.2(22)申请日2022.09.13(71)申请人湖北中医药大学地址430070湖北省武汉市洪山区黄家湖西路16号(72)发明人刘大会徐荣苗玉焕刘启罗鸣许佳伟彭赛男(74)专利代理机构济南圣达知识产权代理有限公司37221专利代理师王志坤(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图5页(54)发明名称一种半夏脱毒微球茎的高效生产方法(57)摘要本发明涉及一种半夏脱毒微球茎的高效生产方法，本发明的生产方法包括培养脱毒苗、组培苗培养及组培瓶缓苗、漂浮盘缓苗、漂浮盘育苗、微球茎采收五个阶段。本发明以珠芽及种子为材料获取脱毒苗；以脱毒苗为材料，利用组织培养技术，进行脱毒微球茎的生产，最大化利用了脱毒苗资源，降低了半夏种苗复壮的成本；本发明基于人工生长室育苗，自动控制温度，不受天气、季节限制；本发明基于漂浮盘无土育苗，可根据苗长势及苗期变化，随时合理调整营养供给，并可减少土传病害的发生和农药使用；本发明将组培苗培育为微球茎，作为半夏原原种的生产材料，为半夏脱毒苗的工厂化生产奠定了基础。本发明所提出的方法易于实施，便于推广。CN115281093ACN115281093A权利要求书1/2页1.一种半夏脱毒微球茎的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将半夏芽头或种子进行消毒；以MS或其稀释培养基对芽头或种子进行培养成苗；(2)以(1)中得到的脱毒苗为材料，获得半夏外植体，经MS培养基一次成苗培养，长出组培苗；组培瓶缓苗；(3)选择具有储水托盘的穴盘为苗床；以蛭石、珍珠岩为基质，水为培养液；将组培苗进行移栽；移栽后，加盖透明盖或覆透明膜，进行漂浮盘缓苗；(4)缓苗结束后，以营养液及其稀释液或改进配方进行培养，营养液浓度随培养时间变化而变化；(5)漂浮盘炼苗后，当大部分半夏苗进入程序性倒苗，停止营养液的供给，调整温度以增加基质挥干和半夏倒苗的速度；基质干透后，对半夏微球茎与基质进行分离；收取微球茎；基质自然风干，保留。2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(1)中，选取健康、无病虫害、长势较好的半夏，挖取珠芽，洗净后切取芽头，消毒；或选取健康、无病虫害、长势较好，具有佛焰苞的半夏，倒苗后，收取种子，25～37℃水浴浸泡10～42h，滤纸吸干水分，75％乙醇浸泡60～90s，再进行消毒，无菌超纯水清洗清洗4～6次，无菌滤纸吸干水分；优选的，所述消毒采用升汞、次氯酸、次氯酸钠或过氧化氢进行消毒；优选的，步骤(1)中，培养条件为温度20～30℃，湿度60±5％；光照2000～6000Lx，光照时间12～14h/d；珠芽培养10～20d可成苗，种子培养50～70d可成苗。3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，所述MS培养基中为6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)1.0～3.0mg/L、萘乙酸(NAA)0.25～0.75mg/L的MS培养基。4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，选择瓶内2/3组培苗高度大于2cm的组培瓶，将瓶盖揭开，进行组培瓶缓苗；缓苗的条件为：温度20～30℃，湿度60±5％，光照2000～6000Lx，光照时间12～14h/d，缓苗时间1～3d，使组培苗适应外界环境。5.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，穴盘每穴直径2～5cm，深4～5cm；种植深度2～4cm；步骤(3)中，基质中，蛭石4～5份、珍珠岩1～2份。步骤(3)中，穴盘装满基质，储水托盘中加水至1/2处s；移栽完毕后盖透明盖或覆透明膜。6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，选择具备根、块茎、叶的组培苗；如果已形成质地坚实，具有表皮的完整小块茎，无根、无叶也可炼苗；步骤(3)中，漂浮盘缓苗的条件为：环境温度20～27℃，光照2000～8000Lx、光照时间10～14h/d，二阶段缓苗时间7～15d，根据实际情况2～4d补一次水，保证储水盘中水位在1/4～1/2。7.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(4)中，所述营养液为MS营养液、日本山崎营养液、霍格兰营养液或日本园式营养液；步骤(4)中，营养液浓度随培养时间变化而变化：0～15d，EC值为0.6～0.8mS/cm；15～30d，EC值为0.8～1.2mS/cm；30～50d，EC值为1.2～2.0mS/cm；50d以后，EC值为2.0～3.0mS/cm。8.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤(4)中，幼苗培育持续70～80d，温2CN115281093A权利要求书2/2页度22～28℃，湿度60±5％，光