一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115369076A(43)申请公布日2022.11.22(21)申请号202210854172.XC12R1/91(2006.01)(22)申请日2022.07.20(83)生物保藏信息CCTCCNO：C20221222022.05.24(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人魏世娜秦启伟李雪竹罗维徐穗锋何小川(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202专利代理师黄绮颖(51)Int.Cl.C12N5/077(2010.01)C12Q1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系及其应用(57)摘要本发明公开了一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系，命名为YSBM，该细胞系于2022年5月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏登记入册编号为CCTCCNO：C2022122，请求保藏人为华南农业大学。该细胞系在低血清培养物中传代100次以上仍然可以正常生长，冻存后细胞复苏率90％以上，复苏细胞能够贴壁并生长分裂，并可以正常传代，细胞形态与增殖能力同冻存前无明显差异。该细胞系对神经坏死病毒(NNV)非常敏感，为深入研究NNV的感染与致病机理奠定了基础。CN115369076ACN115369076A权利要求书1/1页1.一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM，于2022年5月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏登记入册编号为CCTCCNO：C2022122。2.一种培养如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的培养基，所述培养基为完全培养基，且含有低于8vol％的血清。3.如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的保存方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取处于对数生长期的所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM，经胰酶消化后离心，得细胞沉淀物；S2、将所述细胞沉淀和细胞冻存液混合，重悬，得到冻存混合物；S3、将所述冻存混合物放入程序降温盒中，冷冻降温至‑70～‑90℃。4.如权利要求3所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的保存方法，其特征在于：所述细胞冻存液为含有15～20vol％FBS、8～12vol％DMSO的L15培养液。5.如权利要求3所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的保存方法，其特征在于，所述S3中还包括，在‑70～‑90℃冷冻后过夜，隔天放入液氮中长期保存。6.如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的复苏方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、通过水浴加热融化经历液氮冻存的所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM；S2、对已经解冻的所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM与所述冻存混合物中的其他物料分离；S3、用完全培养液重悬所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM，然后在28℃的条件下培养所述所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM。7.如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的子细胞。8.如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM和/或如权利要求7所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的子细胞在神经坏死病毒敏感性检测中的应用，所述应用不包括在疾病诊断中的应用。9.如权利要求1所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM和/或如权利要求7所述黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM的子细胞在生产神经坏死病毒中的应用，所述应用不包括在疾病诊断中的应用。2CN115369076A说明书1/5页一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系及其应用技术领域[0001]本发明属于动物细胞培养技术领域，具体涉及一种黄鳍鲷肌肉组织细胞系及其应用。背景技术[0002]神经坏死病毒(NervousNecrosisVirus，NNV)是一种单链RNA病毒，能引起鱼类病毒性神经坏死病，是对海水鱼类危害重大的病原之一，具有传播性强、感染后果严重、传播途径多、传播范围广的特性。NNV对多种鱼类具有感染性，现今已感染全球120多种鱼类，对处于苗种生产期的仔鱼和幼鱼危害很大，严重者在一周内死亡率可达100％。NNV既可以从亲鱼向受精卵垂直传播感染，也能从养殖环境、饵料等水平传播感染，造成整体海域内鱼类的大规模感染，较强的致病力和死亡率给鱼类养殖业带来沉重打击。[0003]神经坏死病毒的流行和蔓延，对鱼类的人工苗种生产往往造成严重打击，给养殖户造成了巨大的经济损失。为了进一步降低鱼类病毒性神经坏死病危害我国水产养殖业的风险，养殖人员需要一种高效检测NNV病毒的手段，研究人员需要培养大量的NNV用以研究与预防，而病毒的培养需要宿主细胞。因此，研究人员需要一种对神经坏死病毒相对敏感的宿主细胞。发明内容[0004]为了解决上述技术问题，本发明以黄鳍鲷肌肉组织为对象，成功构建了黄鳍鲷肌肉组织细胞系YSBM，该细胞对神经坏死病毒具有较高敏感性，能够有效帮助研究人员研究