检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115491428A(43)申请公布日2022.12.20(21)申请号202210214296.1C12N15/11(2006.01)(22)申请日2022.03.04(71)申请人江汉大学地址430056湖北省武汉市沌口经济技术开发区新江大路8号申请人武汉庆发禾盛农业发展有限公司(72)发明人周俊飞彭海朱晓波陈利红周旭升陈耀东李甜甜肖华锋方治伟(74)专利代理机构北京众达德权知识产权代理有限公司11570专利代理师刘杰(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6869(2018.01)权利要求书1页说明书13页序列表6页附图1页(54)发明名称检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法(57)摘要本发明属于生物技术领域，特别涉及一种检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述引物对组合的核苷酸序列如SEQIDNO.1至SEQIDNO.24所示；避免了传统Real‑timePCR技术一次只能实现一个目的，需要进行多次扩增和检测才能覆盖样本中的多个靶标转基因成分，避免了现有技术在进行多重PCR时，出现较多的假阳性和假阴性结果，可以通过一次高通量测序和分析，进行9个以上的多重PCR反应，无需每组引物单独检测，因此大大提高了检测效率。CN115491428ACN115491428A权利要求书1/1页1.一种检测棉花转基因品系的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括：特异性扩增MON15985a的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.1至SEQIDNO.2所示；特异性扩增MON1445的引物对，包括2对引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.3至SEQIDNO.6所示；特异性扩增MON88913的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.7至SEQIDNO.8所示；特异性扩增GHB614的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.9至SEQIDNO.10所示；特异性扩增LLcotton25的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.11至SEQIDNO.12所示；特异性扩增DAS‑24236‑5的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.13至SEQIDNO.14所示；特异性扩增DAS‑21023‑5的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.15至SEQIDNO.16所示；特异性扩增MON531的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.17至SEQIDNO.18所示；特异性扩增GHB119的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.19至SEQIDNO.20所示；特异性扩增T304‑40的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.21至SEQIDNO.22所示；和/或，特异性扩增MON88701的引物对，其核苷酸序列如SEQIDNO.22至SEQIDNO.24所示。2.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括特异性扩增选自下组的棉花转基因品系特异性序列的引物对：MON15985a、MON1445、MON88913、GHB614、LLcotton25、DAS‑24236‑5、DAS‑21023‑5、MON531、GHB119、T304‑40和MON88701。3.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括用于扩增棉花内参基因Gh_Sad1和Gh_SAH7的引物对。4.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，扩增棉花内参基因Gh_Sad1的引物对的两对引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.25‑SEQIDNO.28所示。5.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，扩增棉花内参基因Gh_SAH7的引物对的两对引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.29‑SEQIDNO.32所示。6.一种检测棉花转基因品系的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1‑5任意一项所述引物对组合。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内含有所述引物对组合。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括多重PCR预混液。9.权利要求1‑5任意一项所述的引物对组合或权利要求6‑8任意一项的所述的试剂盒在检测棉花转基因品系及其相关产品中的应用。10.一种检测棉花转基因品系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：得到待测棉花的DNA和权利要求1‑5任意一项所述的引物对组合；以所述DNA为模板，将所述引物对组合加入反应体系中，进行扩增反应，得到扩增产物；将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量文库；将所述高通量文库中的基因序列进行分析，得到检测棉花转品系的结果。2CN115491428A说明书1/13页检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法技术领域[0001]本发明属于生物技