一种提高难出胚大白菜胚诱导率的培养基及其方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115644062A(43)申请公布日2023.01.31(21)申请号202211371891.2(22)申请日2022.11.03(71)申请人天津科润农业科技股份有限公司地址300000天津市经济技术开发区黄海路276号泰达中小企业园2号楼310号(72)发明人张红王超楠黄志银范伟强张斌刘晓晖(74)专利代理机构成都顶峰专利事务所(普通合伙)51224专利代理师李娜(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图1页(54)发明名称一种提高难出胚大白菜胚诱导率的培养基及其方法(57)摘要本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种提高难出胚大白菜胚胚诱导率的培养基及其方法。其中本发明的培养基为向1/2NLN培养基中添加浓度为0.05‑2.0mg/L的灰黄霉素。本方案首次提出向培养基内添加抗生素灰黄霉素用以提高供试白菜小孢子胚胚诱导率的方法，该方法不仅可以显著地提高难出胚白菜材料的出胚率，在一定程度上打破基因型对小孢子胚诱导的限制，还可降低小孢子培养过程中的污染率，有助于建立白菜小孢子高效培养体系，加快白菜种质创新及育种进程。CN115644062ACN115644062A权利要求书1/1页1.一种提高难出胚大白菜胚诱导率的培养基，其特征在于，向1/2NLN培养基中添加浓度为0.05‑2.0mg/L的灰黄霉素。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述灰黄霉素的浓度为0.1‑1.0mg/L。3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述灰黄霉素的浓度为0.5mg/L。4.一种提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，采摘初花期至盛花期的花蕾经过处理后得到纯化小孢子，对所述小孢子培养时采用如权利要求1‑3任一所述的培养基。5.根据权利要求4所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，所述花蕾的处理步骤依次包括消毒和研磨；优选的，所述花蕾的消毒前处理步骤还包括预冷处理。6.根据权利要求5所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，所述花蕾为单核靠边期的花蕾。7.根据权利要求5所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，所述消毒方式包括酒精消毒和次氯酸钠消毒；所述研磨方式为将消毒后的花蕾倒入B5洗涤培养基研磨挤压使小孢子释放在培养基中得到小孢子溶液，倒掉上清液后得到纯化小孢子。8.根据权利要求5所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，所述预冷处理的温度为4‑8℃，预冷时间为24‑72小时。9.根据权利要求4‑8任一所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，对所述处理后的纯化小孢子用培养基进行重悬稀释，获得含有纯化小孢子的密度为1×105‑2×105个/mL的悬浮液后进行培养。10.根据权利要求9所述的提高难出胚大白菜胚诱导率的方法，其特征在于，在进行培养之前对所述悬浮液进行热激处理，热激处理的温度为30‑35℃，时间为24‑72小时。2CN115644062A说明书1/12页一种提高难出胚大白菜胚诱导率的培养基及其方法技术领域[0001]本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种提高难出胚大白菜胚胚诱导率的培养基及其方法。背景技术[0002]大白菜(BrassicarapaL.ssp.pekinensis)是一种两年生叶用蔬菜，属于十字花科芸薹属芸薹种。据不完全统计，目前大白菜全国每年播种面积近267万hm2，占比全国蔬菜总播种面积的15％左右，是我国栽培面积最大的蔬菜作物之一。近年来随着我国蔬菜产业模式和人民消费方式的改变，市场对适宜冬春季节栽培的耐抽薹大白菜的需求不断增加，但国内育成的耐抽薹大白菜品种由于育种研究起步相对较晚，种质资源相对狭窄，耐抽性和商品性与国外品种相比，尚存在明显差距，因此目前亟需不断提高育种者对耐抽薹资源的搜集利用意识，加强应用高效育种技术加速优质种质资源创制纯化的技能。[0003]游离小孢子培养是在花药培养基础上发展起来的一种高效再生体系。它主要是经过单倍体小孢子的培养、染色体加倍、胚胎发生等过程，在1～2年内即可获得大量基因型丰富且稳定遗传的纯合自交系材料,为新种质创制及新品种选育提供更加高效的途径。[0004]目前，芸薹属小孢子培养过程中主要是通过预处理以及在培养基中添加不同配比的激素、活性炭等添加剂来激发小孢子出胚，但在实际应用中小孢子胚诱导能否成功在极大程度上受到基因型的影响。就大白菜而言，有研究表示，拧抱炮弹型大白菜品种胚诱导率及子叶胚数量要优于叠抱型和合抱型品种，夏秋耐热早熟的大白菜品种和冬大白菜中晚熟品种小孢子胚的胚诱导率也明显高于春性耐抽薹的早熟品种。对于耐抽薹类型等难出胚的品种很难找到一种具有显著效果的体系或方法诱导小孢子的出胚率。为了