一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115777528A(43)申请公布日2023.03.14(21)申请号202310085469.9(22)申请日2023.02.09(71)申请人广州市农业科学研究院地址510220广东省广州市海珠区琶洲大道17-19号(72)发明人任海龙肖婉钰周贤玉孙艺嘉张晶郑岩松许东林张华戴修纯(74)专利代理机构北京正华智诚专利代理事务所(普通合伙)11870专利代理师陈航(51)Int.Cl.A01H1/02(2006.01)A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法(57)摘要本发明公开了一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法。其包括以下步骤：（1）于变温条件下对紫菜薹进行光暗交替培养，于恒温条件下对菜心进行光暗交替培养，杂交获得F1代杂交种子；（2）按照紫菜薹的培育方式将杂交种子培育至抽薹开花；（3）挑选步骤（2）所产生的花蕾，并进行消毒，然后离心获得小孢子；（4）将小孢子置于NLN培养基中；（5）于暗室中对步骤（4）中的小孢子进行热激处理，然后再转入暗室中震荡培养即可。本发明可将紫菜薹的优良性状转育到菜心中的周期从3‑4年，缩短到1年以内，并且获得基因型完全纯合的材料。CN115777528ACN115777528A权利要求书1/1页1.一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）于变温条件下对紫菜薹进行光暗交替培养，于恒温条件下对菜心进行光暗交替培养，并使两者同期抽薹开花，然后杂交获得F1代杂交种子；（2）按照紫菜薹的培育方式将杂交种子培育至抽薹开花，然后取其无损花序，于4~8℃诱导12~24h后保存；（3）挑选步骤（2）所产生的花蕾，并进行消毒，然后离心获得小孢子悬浮液；（4）将小孢子置于NLN培养基中；所述NLN培养基包括终浓度为1000~1700mg/LNLN、0.1~0.5mg/LNAA、0.05~0.2mg/L6‑BA、100000~140000mg/L蔗糖、10000~20000mg/L聚乙二醇以及400~600mg/L活性炭；（5）于暗室中对步骤（4）中的小孢子进行热激处理，然后再转入暗室中震荡培养。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，紫菜薹的培养过程为：于变温条件下进行光暗交替培养，即25℃培养16h后，10℃培养8h。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，菜心于25℃环境下进行14h/10h光暗交替培养。4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤（2）中诱导温度为4℃，诱导时间为12h；保存温度为8℃，保存时间为12h。5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤（3）中选择处于单核靠边期的花蕾，然后将花蕾用75%乙醇表面消毒25s，再用0.1%升汞表面消毒花蕾5分钟，最后无菌水清洗。6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，NLN培养基pH值为5.8，其含有以下终浓度的组分：1.7g/LNLN、0.2mg/LNAA、0.05mg/L6‑BA、120g/L蔗糖、20g/L聚乙二醇以及0.6g/L活性炭。7.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，热激温度为32.5℃，热激时间为36h。8.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，紫菜薹品种为洪山，菜心品种为油绿702。9.一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养基，其特征在于，所述培养基为NLN培养基，其包括以下终浓度的各组分：1000~1700mg/LNLN、0.1~0.5mg/LNAA、0.05~0.2mg/L6‑BA、100000~140000mg/L蔗糖、10000~20000mg/L聚乙二醇以及400~600mg/L活性炭。10.权利要求9所述的培养基在提升小孢子出胚率中的用途。2CN115777528A说明书1/6页一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法技术领域[0001]本发明属于小孢子培育技术领域，一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法。背景技术[0002]菜心（BrassicacampestrisL.ssp.Chinensisvar.utilisTsenetLee）又名菜薹，是岭南地区栽培规模最大的特产蔬菜之一，在我国蔬菜生产中的地位越来越重要，其中油绿702是广东省的主导菜心品种，具有优质、高产、适应性广的特点。紫菜薹（Brassicacampestrisvar.purpurariaL.H.Bariley）起源自长江中游流域，是白菜亚种经过长期栽培驯化而形成的一个变种，因其紫色的花薹富含丰富的营养物质，尤其是具有保健功能的花青素，已经作为优质高档的蔬菜在全国范围内引种栽培，其中洪山菜薹是