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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115807119A(43)申请公布日2023.03.17(21)申请号202211020169.4(22)申请日2022.08.24(71)申请人江苏省农业科学院地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街50号(72)发明人姜朋张旭吴磊何漪李畅(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所32237专利代理师杨文晰(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书20页序列表(电子公布)附图2页(54)发明名称小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组及应用(57)摘要本申请公开一组小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组,由核苷酸序列如SEQIDNO.10所示的前引物、核苷酸序列如SEQIDNO.11所示的后引物、核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的通用引物组成;该多重KASP标记引物组可以同时检测小麦的Rht‑B1和Rht‑D1基因;相较于现有检测方式,该引物组首次实现了Rht‑B1和Rht‑D1基因的同时检测,效率提升了一倍,成本降低了一半,极大提高了育种效率,具有广泛的应用前景。CN115807119ACN115807119A权利要求书1/1页1.一组小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组,其特征在于,所述引物组由核苷酸序列如SEQIDNO.10所示的引物F、核苷酸序列如SEQIDNO.11所示的引物H、核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的通用引物R组成。2.如权利要求1所述多重KASP标记引物组在同时检测小麦Rht‑B1和Rht‑D1基因中的应用。3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述应用是指以所述多重KASP标记引物组对小麦样品进行PCR扩增后,再对扩增产物进行荧光检测;如果荧光检测结果为蓝色,则说明样品小麦的基因型为Rht‑B1b/Rht‑D1a;如果荧光检测结果为红色,则说明样品小麦的基因型为Rht‑B1a/Rht‑D1b;如果荧光检测结果为绿色,则说明样品小麦的基因型为Rht‑B1b/Rht‑D1b;如果荧光检测结果为D黑色,则说明样品小麦的基因型为Rht‑B1a/Rht‑D1a或空白。4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增是指:PCR反应体系:KASPAssayMix0.07μL,浓度为20ng/μL的小麦模板DNA2.43μL,2×KASPMasterMix补足至5μL;其中,每100μL所述KASPAssayMix包括:浓度为100μM的所述引物F12μL,浓度为100μM的所述引物H12μL,浓度为100μM的所述通用引物R30μL,以ddH2O补足至100μL;PCR反应程序:94℃15min;94℃20s,61‑55℃1min,每个循环降低0.6℃,共10个循环;94℃20s,55℃1min,共26个循环。2CN115807119A说明书1/20页小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组及应用技术领域[0001]本申请涉及小麦育种领域,特别是一种与小麦株高相关的KASP标记引物组及其应用。背景技术[0002]株高是小麦重要的农艺性状,影响植株的形态结构,并与田间群体产量密切相关。小麦矮秆基因的利用是绿色革命的重要组成部分,对现代小麦育种具有深远影响(HeddenP.Thegenesofthegreenrevolution.TrendsinGenetics,2003,19:5‑9)。经典遗传学研究表明,小麦株高是一个复杂性状,由多个基因控制,存在主效基因,也有微效位点。迄今为止,已有25个Rht基因被命名(MoY,VanzettiLS,HaleI,SpagnoloEJ,GuidobaldiF,Al‑OboudiJ,OdleN,PearceS,HelgueraM,DubcovskyJ.IdentificationandcharacterizationofRht25,alocusonchromosomearm6ASaffectingwheatplantheight,headingtime,andspikedevelopment.TheoreticalandAppliedGenetics,2018,131:2021‑2035;TianX,WenW,XieL,FuL,XuD,FuC,WangD,ChenX,XiaX,ChenQ,HeZ,CaoS.MolecularmappingofreducedplantheightgeneRht24inbreadwheat.FrontiersinPlantScience,2017,https://doi.org/10.3389/fpls.2017.01379;McIntoshRA,Dubcov